滿山紅來源於杜鵑花科杜鵑屬植物興安杜鵑(Rhododendron dauricum L.)的建立鹃素葉。滿山紅在治療咳喘方麵效果突出,满山常用來治療慢性氣管炎,红叶含量慢性支氣管炎等[2]。指纹滿山紅以黃酮類、图谱香豆素類、并测有機酸類、定杜揮發油類等化學成分為主,建立鹃素其中藥效作用突出的满山是黃酮類[3],包括杜鵑素、红叶含量山奈酚、指纹金絲桃苷等。图谱中藥材含有的并测化學成分複雜,影響其化學成分種類和含量的定杜因素也很多,因此需要規範中藥材的建立鹃素質量標準。中藥指紋圖譜可以使得到的有用化學信息最大化,起到把控中藥產品的質量的作用[4]。因此建立中藥指紋圖譜意義重大,也為後續中藥材研究奠定基礎。
1 儀器與材料
1.1 主要儀器
美國Agilent公司的1260型高效液相色譜儀;美國THERMO公司的G10S UV-Vis型紫外分光光度計;昆山市超聲儀器有限公司的KQ-250DE型醫用數控超聲波清洗器;德國賽多利斯公司的BP211D型天平(d=0.01 mg);天津市泰斯特儀器有限公司的98-1-B型電子控溫電熱套。
1.2 實驗材料
1.2.1 試劑
實驗中高效液相色譜儀使用的是美國Fishers公司生產的色譜級甲醇、乙腈和甲酸,水為超純水;除此之外實驗用到的試劑為分析純。
1.2.2 試藥
杜鵑素(批號:201605)為中國藥品生物製品檢定所生產。
1.2.3 飲片來源
滿山紅藥材購於黑龍江五林、黑龍江林口、吉林通化,每個產地5批藥材,分別是五林01~05、林口01~05、通化01~05,共15批,編號分別是S1~S15。由中國科學院長春應用化學研究所質譜中心皮子鳳副研究員鑒定為興安杜鵑Rhododendron dauricum L.葉。
2 方法與結果
2.1 對照品溶液的製備
將杜鵑素對照品精密稱量,取適量甲醇製成每1 mL含0.1 mg的溶液,即得。
2.2 供試品溶液的製備
選用滿山紅葉100 g,采用回流法提取2回,第1回加入12倍水,放置30 min,回流提取30 min,過200目濾布,濾液備用;藥渣第2回加入10倍水,提取20 min,過200目濾布,合並2次濾液,減壓濃縮至500 mL,凍幹,取凍幹粉0.1 g,加入20 mL水超聲提取(功率100W,頻率40 KHz)60 min,放至室溫,搖勻,過0.45 μm的微孔濾膜,即得。
2.3 色譜條件的確定
2.3.1 色譜條件
采用Shim-Pack XR-ODS Ⅲ (2.0 mmi.d×150 mm)色譜柱,用甲醇-0.3%甲酸水溶液為流動相係統梯度洗脫,流速為0.2 mL·min-1,梯度洗脫,檢測波長為297 nm,柱溫為25 ℃,進樣量為10 μL。梯度見表1。
2.3.2 空白溶劑幹擾考察
將甲醇作為空白溶劑,按照“2.3.1”項色譜條件,開始檢測。滿山紅葉的指紋圖譜不受空白溶劑影響。見圖1。
2.3.3 對照品和供試品峰比對
將“2.1”項的對照品溶液和“2.2”項的供試品溶液,按照“2.3.1”項的色譜條件,用高效液相色譜儀檢測。結果顯示所選藥材中含有杜鵑素。對照品色譜圖見圖2,供試品色譜圖見圖3。
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