按“1.2.5”項下采用QAMS和內標法計算羊肚菌中17種氨基酸的测多测定含量,結果見表4。评法由表4可知,羊肚QAMS和內標法測定結果基本一致。菌中基酸對2種方法測得結果進行t檢驗分析,种氨結果顯示,测多测定2種方法測定的评法17種有效成分的含量均無顯著差異(P>0.05)。說明一測多評法在測定羊肚菌氨基酸中的羊肚適用性和可行性得到了驗證,在對照品缺乏的菌中基酸情況下,所建立的种氨一測多評法可以作為一種經濟、準確、测多测定快捷的评法方法應用羊肚菌質量的評價。
采用依利特HypersilODS2(250mm×4.6mm,5μm)、菌中基酸AgilentC18(250mm×4.6mm,种氨5μm)色譜柱在Agilent1100HPLC測定16種氨基酸的相對校正因子影響見表5。由表5可知,16種氨基酸的相對校正因子在不同色譜柱下的RSD均小於1.85%,說明相對校正因子在不同品牌色譜柱下具有良好的重複性。
采用依利特HypersilODS2(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱,考察Agilent1100HPLC、Agilent1260HPLC對16種氨基酸相對校正因子的影響見表5。由表5可知,不同儀器下的氨基酸相對校正因子的RSD均不大於1.57%,重複性良好,說明此方法適用於不同的色譜體係。
色譜峰的準確定位是保證QAMS法應用的前提。以穀氨酸為內參物,采用不同色譜柱及高效液相色譜儀,驗證相對保留時間定位色譜峰的準確性,詳見表6。由表6可知,在不同色譜柱和色譜係統下,相對保留時間變化幅度較小,RSD均不大於1.14%,可準確定位。
采用一測多評法測定6個地區羊肚菌中17種氨基酸的含量見表7。由表7可知,羊肚菌富含8種必需氨基酸,其占氨基酸總量的47.22%~55.34%,其中Thr含量是最高的,占總量的16.55%~21.77%。甜味氨基酸占總量的36.60%~45.77%,鮮味氨基酸占總量的21.63%~27.34%。Leu和Val具有焙烤風味和特殊甜味,這些氨基酸在羊肚菌香味的形成過程中有重要作用,這是羊肚菌具有獨特風味的重要原因。
藥用氨基酸種類齊全,占氨基酸總量的47.74%~56.42%,其中Glu、Lys平均占藥用氨基酸總量的17.29%、17.05%。羊肚菌中含有的豐富賴氨酸可以補充穀物中賴氨酸的不足,Glu對腦神經損傷、癲癇有效,還具有護肝功效。綜上所述,羊肚菌富含各類藥用氨基酸為其開發各種保健食品、藥品以及日常食用的藥膳提供了一定的基礎。
不同產地羊肚菌之間氨基酸總量有明顯差異,長坡嶺森林公園下野生的羊肚菌樣品氨基酸總量最高,新疆羊肚菌氨基酸總量最少,且不同地區的各氨基酸含量有一定差異,由此可知其品質差異與其環境、氣候以及種植方式等因素有關。
對六個不同地區的羊肚菌氨基酸測定結果顯示,羊肚菌中氨基酸含量豐富,且富含人體所需的必需氨基酸和藥用氨基酸,有較高的食用價值,可作為人體必需氨基酸營養的天然來源之一,且極具開發作為補充氨基酸的功能性食品;其鮮味、甜味氨基酸含量較高,是開發食品調味劑的天然寶庫。綜上所述,羊肚菌在食品、醫療領域具有很大的開發潛力和廣闊的應用前景。
采用QAMS法測定羊肚菌中17種氨基酸的含量,建立並應用內標法驗證該方法同時測定羊肚菌中17種氨基酸含量的可行性,結果表明,兩種方法測得的結果無顯著性差異(P>0.05),不同色譜柱和儀器之間的相對校正因子重複性良好,且QAMS法操作簡單,極大程度提高了工作效率,可為建立羊肚菌的質量評價提供參考。同時,為羊肚菌的應用提供一定的理論支持,為羊肚菌的開發利用指明了方向,對推動羊肚菌行業的發展有重要意義。
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