在不可控出血中,微孔外生物降創傷出血和外科手術失血是多聚日常意外事故中經常發生的事故,出血失控也是糖止導致傷員死亡的重要因素。為了避免大量失血,血粉析因此開發出有效、成分快速並且安全的及体解分止血劑在事故現場以及院前及時有效的止血意義重大。近年來,微孔外生物降隨著生物醫學、多聚材料學、糖止生物工程的血粉析快速發展,生物止血材料在促進傷口愈合方麵顯示出巨大潛力。成分各種類型的及体解分止血粉也不斷被開發出來,其類型逐漸由動物源向植物源轉化,微孔外生物降不可吸收向可吸收轉化。多聚其中,糖止微孔多聚糖止血粉是一種自主研發的新型高分子材料,主要是由馬鈴薯植物澱粉經過變性處理後所製成的微孔多聚糖澱粉顆粒,可通過立即吸收血液中的液體成分以及濃縮血小板和凝血因子來實現,具有良好吸附凝血成分的效果,起到加速內源性凝血過程,從而達到快速的術中止血目的。其作為一種來源於植物澱粉的材料,理論上來說是非常安全的,並且在人體傷口處施用後,最終會被組織以及體液中相應的酶分解,形成單糖等機體正常所需成分,最終被機體所代謝出體外。生物相容性和高效止血材料的開發可以被視為術中和術後快速止血的最佳方法。2004年,Murat等首次描述了植物性澱粉來源的止血劑。目前,可吸收止血劑已經成為外科醫療設備的重要組成部分,用於處理術中出血。鑒於這些止血劑能夠有效滿足外科手術過程的基本需求,新的止血劑不斷開發,其安全性也是最為關注的。
止血粉的商業信息表明,它們在外科手術中被用作控製毛細血管、靜脈和小動脈出血的輔助止血劑。成功的止血對於最大限度地減少與一般外科手術有關的圍手術期發病率和死亡率至關重要。在外科手術過程中,當無法通過常規方法控製出血時,通常使用外科止血劑作為輔助手段,該方法可以實現快速止血的安全性和有效性,易於使用且能夠在大傷口中形成持久止血並且對血源性疾病沒有任何風險。Giday等研究證實了止血粉末可以在動物動脈出血中的實現初始止血,而且沒有腸梗阻或意外的管腔效應,沒有局部或局部顆粒效應,沒有全身栓塞效應,也沒有全身凝血作用。在臨床上,這種多聚糖止血粉在內窺鏡鼻竇手術、皮膚外科手術和腹腔鏡手術中表現了出色的效果。目前國內尚無同類具有自主知識產權的產品麵市。因此,本文重點探討微孔多聚糖止血粉的主要成分以及止血粉生物降解的動態變化規律,以期為臨床使用止血粉提供代謝依據。
微孔多聚糖止血粉。
止血粉樣品在烘箱中50℃烘至恒重後,稱量3份,每份稱取約5.0mg,分別溶於1mol/L三氟乙酸(TFA)溶液,配成濃度5mg/mL。100℃下降解12h,分別取200μL降解液旋轉蒸發去除酸解樣品中的TFA,用稀氫氧化鈉溶液調pH至中性,加水定容於20mL容量瓶,配成上樣濃度50×10-6,0.22µm濾膜過濾備用。
配製100×10-6的葡萄糖和麥芽糖標準溶液及其混合標準溶液;配製7個濃度梯度葡萄糖和麥芽糖二者的混合標準溶液,葡萄糖濃度分別為0.1×10-6、0.5×10-6、1×10-6、2×10-6、4×10-6、8×10-6和10×10-6,麥芽糖濃度分別為1×10-6、5×10-6、10×10-6、20×10-6、40×10-6、80×10-6、100×10-6;進樣量為20μL;采集時間為40min。
將止血粉配成母液濃度為1mg/mL,沸水溶解,冷卻至室溫,再將母液倍比稀釋成0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL和0.03125mg/mL的溶液,分別取200μL加入至96孔板,然後再分別加入0.1mol/L碘溶液10μL,充分混勻後立即采用全波長酶標儀在610nm處測其吸收度(A值),繪製澱粉標準曲線。
稱取定量止血粉於烘箱中50℃烘至恒重。配製20mmol/LNaH2PO4和6.7mmol/LNaCl溶液,用1mol/LNaOH/HCl調節pH為6.9,稱量止血粉110.8mg,用上述緩衝液配成止血粉濃度為1mg/mL。加入30.7mgCaCl2(~2.5mmol/L),於沸水中溶解5min,冷卻至室溫。分別取出3份各3mL溶液,作為酶降解0h的樣品。剩餘溶液中加入3mgα-澱粉酶粉末,混勻。把上述已加α-澱粉酶溶液分裝於三個相同的50mLEP管中(3個平行樣),每管33mL。放入37℃恒溫水浴鍋中進行降解,分別作用1h、2h、3h、5h、8h、12h、24h、36h、48h後,每個時間點取3mL樣品,100℃煮沸除酶活性。其中1mL樣品於12000r/min離心15min,取上清液,超純水稀釋10倍至止血粉濃度為100×10-6用於離子色譜分析;其餘2mL樣品滅酶活後不離心直接用於止血粉澱粉含量測定,每個樣品分別取3份200μL轉移至96孔板,然後分別加入0.1mol/L碘溶液10μL,充分混勻後立即采用全波長酶標儀在610nm處測其吸收度(A值)。
如圖1所示,酸降解止血粉的標準曲線擬合離子色譜分離條件下,果糖和葡萄糖的保留時間分別為14.9min和10.5min;葡萄糖的標準曲線為y=34.416x-8.551,線性相關係數為0.9997。
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