目的不同:評價不同商品化試劑定量檢測臨床血清樣本乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)性能的差異。方法:(1)應用5種商品化HBV DNA定量試劑(2種進口試劑A和B,商品3種國產試劑C、D和E)分別對6例混合血清樣本進行檢測，化试並對結果進行比較；3種國產試劑對6例混合血清樣本以及103和106兩個水平的剂对检测结果HBV DNA國家標準物質GBW(E)090137和GBW(E)090139分3個批次檢測，分析其精密度和正確度。临床(2)采用3種國產試劑定量檢測43例慢性乙型肝炎患者血清樣本HBV DNA,血清响並分析其相關性和一致性。結果:(1)定量檢測6例混合血清樣本中HBV DNA,样本試劑B、C與A的定量的影檢測結果差異均無統計學意義(P>0.05),而試劑D、E的不同檢測結果均顯著低於試劑A(P<0.05)。(2)定量檢測6例混合血清樣本以及103和106兩個水平的商品HBV DNA國家標準物質，3種國產試劑的化试CV均小於5%,國家標準物質的實際檢測值與靶值的差值絕對值均小於0.4 log10 IU/mL,精密度和正確度滿足行業標準。(3)對於43例臨床血清樣本，剂对检测结果試劑C、临床D和E的血清响陽性檢出率分別為95.35%(41/43)、95.35%(41/43)、样本86.05%(37/43);對於檢測結果均在3種試劑定量範圍內的24例臨床血清樣本，HBV DNA定量檢測結果為C>D>E(P<0.05),3種試劑的檢測結果兩兩間均呈線性相關(C vs D:R2=0.93,Y=0.973X-0.164;C vs E:R2=0.61,Y=0.770X+0.210;D vs E:R2=0.69,Y=0.809X+0.270),試劑C和D、C和E、D和E的Bland-Altman分析發現其檢測結果差值平均值分別為0.28、0.80和0.51 log10 IU/mL,相應的95%一致性界限分別為(-0.30,0.86)、(-0.62,2.21)、(-0.74,1.77),相應的95%一致性界限以內的點分別占95.83%(23/24)、95.83%(23/24)和91.67%(22/24),其一致性界限範圍內檢測值的最大差異分別為0.85、1.96和1.25 log10IU/mL。試劑C和D、C和E、D和E的檢測結果差值>1.0 log10 IU/mL的血清樣本分別占0(0/24)、33.33%(8/24)和25.00%(6/24)。結論:滿足行業標準的不同商品化國產試劑定量檢測臨床血清樣本HBV DNA的性能存在顯著差異，在常規臨床實踐中互換用於臨床決策時務必慎重。
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一個嚴重的全球公共衛生問題，據估計全球有2.92億HBV感染者(HBsAg陽性),其中我國約有8600萬。HBV可造成慢性感染，進而發展為肝硬化和肝細胞癌，危及患者生命。血清中高水平HBV DNA已被確定為肝硬化和肝細胞癌的主要危險因素。通過抗病毒治療抑製HBV DNA複製，是預防和延緩慢性乙肝患者進展為肝硬化、終末期肝病和肝細胞癌的重要措施。敏感、準確定量HBV DNA在確定HBV感染階段、治療指征、治療終點、監測治療反應以及早期識別耐藥中起著至關重要的作用。國際肝病協會對於HBV DNA超敏定量檢測的試劑要求包括高靈敏度10～15 IU/ml、寬線性範圍1～9 log10 IU/mL、特異性強和重複性好。對於大多數患者HBV管理需要長期監測HBV DNA,同一患者可能在不同的醫院監測其體內病毒載量，而不同的醫院實驗室可能應用不同的檢測試劑。目前我國市場上有多種進口和國產的商品化HBV DNA超敏定量試劑，並且均已獲國家藥品監督管理局(NMPA)批準，其中羅氏的AmpliPrep/COBAS TaqMan(CAP/CTM)HBV診斷試劑和雅培的RealTime HBV診斷試劑是目前國際上通用的HBV DNA檢測試劑,前者在國際上應用更廣泛。由於不同商品化試劑的檢測性能可能存在差異，而臨床上不同的實驗室采用不同的商品化試劑定量檢測特定患者血清中HBV DNA,可能導致其檢測結果不同。因此，本研究主要擬對3種不同商品化國產試劑定量檢測臨床血清樣本中HBV DNA的結果進行比對，以評價不同試劑的臨床性能以及在常規臨床實踐中互換使用的可接受性。
收集2019年4月我院收治的慢性HBV感染患者血清若幹份，製備成6個濃度的混合血清，用於檢測。收集2019年7月我院收治的43例慢性HBV感染患者血清樣本，其中男25例，女18例，年齡20～70歲。
AmpliPrep/COBAS TaqMan(CAP/CTM)HBV診斷試劑(試劑A,羅氏);RealTime HBV診斷試劑(試劑B,雅培);3種國產HBV核酸定量檢測試劑(分別為試劑C、D和E);乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)血清標準物質GBW(E)090137和GBW(E)090139(北京康徹斯坦生物技術有限公司)。COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®病毒載量檢測係統(羅氏);M2000病毒載量檢測係統(雅培);三家國產試劑相配套的半自動磁珠式核酸提取儀；COBAS®Z480全自動熒光定量PCR分析儀(羅氏)。
分別用6種試劑對6例混合血清樣本進行平行檢測(表1),試劑A和B分別檢測一次，試劑C、D和E各分3批進行3次檢測。試劑A和B分別采用各自配套的封閉係統進行核酸提取和擴增；試劑C、D和E分別采用各自配套的半自動磁珠式核酸提取儀進行核酸提取，擴增均在COBAS®Z480全自動熒光定量PCR分析儀上進行。具體操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。
分別用3種國產試劑C、D、E對43例慢性HBV感染患者血清樣本進行平行檢測。核酸提取分別采用各自配套的半自動磁珠式核酸提取儀進行，擴增均在COBAS®Z480全自動熒光定量PCR分析儀上進行。具體操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。
各試劑每批次均做陰性對照和北京康徹思坦生物技術有限公司生產的GBW(E)090137(靶值1.41×103 IU/mL)、GBW(E)090139(靶值4.6×106 IU/mL)兩個水平的HBV DNA血清標準物質。結果判讀嚴格按照試劑說明書進行。確保質控在控後再進行結果分析。
定性檢測結果以檢出或未檢出表示，低於相應試劑廠家聲稱的檢出限判定為未檢出。隻有超過該試劑聲稱的定量下限且在其定量線性範圍的定量檢測結果用於進一步分析。
所有檢測結果均以log10 IU/mL表示，采用SPSS 17.0和Medcalc 15.2.2軟件進行統計學分析。呈正態分布的計量資料以x±s表示，采用配對樣本t檢驗；非正態分布的計量資料，采用Wilcoxon符號秩和檢驗；計數資料采用配對χ2檢驗；兩種檢測方法的相關性分析采用Pearson相關性以及線性回歸分析；采用Bland-Altman圖分析兩種檢測方法的一致性。P<0.05為差異有統計學意義。
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