精油因其獨特的杉木組成和良好的生物活性，在抗菌、油中研究醫藥及化妝品等領域有非常廣泛的柏木柏木應用。
柏木油作為世界十大精油之一，烯和市場需求量很大。醇的测定柏木油取自柏木的杉木木屑，然而柏木的油中研究成材需要經曆一個較長的生長周期(大約為60年)，這無疑是柏木柏木限製柏木油產業發展的關鍵性因素。杉木油無論從香氣特征還是烯和主要化學成分上來講都與柏木油類似，而且杉木具有快速生長的醇的测定特點，
一般在20年以內即可成材，杉木因此杉木油完全可以替代部分柏木油在天然香料工業中的油中研究應用。柏木油和杉木油的柏木柏木主要組分是。α-柏木烯、烯和β-柏木烯、醇的测定柏木醇和羅漢柏烯等。研究表明，柏木醇是杉木油具有抗菌、抗蟎、抗蟻活性的主要成分之一。此外柏木醇還具有改善睡眠、緩解壓力和鎮靜的效果。柏木烯是某些合成香料的重要原料，其合成的香料，如甲基柏木酮、柏木酮、柏木烯醇和環氧柏木烷被廣泛應用於日用化妝品、香水、香皂等領域。
近些年，學者們采用氣相色譜一質譜聯用儀(GC—MS)對杉木油的化學成分進行了鑒定和分析。目前，柏木烯和柏木醇的檢測定量方法普遍采用的是麵積歸一化法，這種方法不僅不能準確定量而且會由於進樣量的較大誤差而導致較低的檢測準確性。為了準確定量且提高檢測準確性，本實驗研究了內標法對柏木烯和柏木醇的定量分析。
一、材料與方法
1、實驗材料與儀器
α-柏木烯標準品(純度＞95.0％，批號BCBSl339V)、β-柏木烯標準品(純度＞95.0％，批號28622511V)和柏木醇標準品(純度＞99.0％，批號BCBTl642)：Sigma-Aldrich公司；反式-茴香烯標準品(純度為99％，批號C1728112)：Aladdin公司，作為內標物使用；乙酸乙酯(色譜純)：SR公司。
GC-2010Plus氣相色譜儀和FID檢測器：Et本島津企業管理(中國)有限公司；HP-FFAP毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)：美國安捷倫科技(中國)有限公司。
2、實驗方法
（1）標準溶液的製備
混標溶液：分別稱取0.3g左右α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇標準品於同一個25mL容量瓶中，用少量乙酸乙酯溶解後稀釋至刻度，搖勻待用。
內標溶液：精密稱取1.0g茴香烯於100mL容量瓶中，用少量乙酸乙酯溶解後稀釋至刻度，搖勻待用。
（2）色譜條件
本實驗采用配備有FID檢測器的氣相色譜儀進行檢測分析。以高純氮氣為載氣，載氣流量為3.0mL／min；空氣流量、氫氣流量和尾吹流量分別為400mL／min、40mL／min和40mL／min；進樣口溫度為250℃，采用分流進樣，分流比為50:1，進樣量1μL；色譜柱初始溫度為70℃，保持5min，然後以8℃／min的速率升至210℃，保持11min；檢測器溫度為250℃。
3、內標法檢測的驗證
（1）精密度的驗證
準確移取2mL混標溶液於10mL容量瓶中，加入2mL內標溶液，然後用乙酸乙酯稀釋至刻度，充分混勻。在上述色譜條件下，對此溶液進行色譜分離，考察各目標峰的分離情況以及方法的精密度。精密度實驗內容如下：日內重複進樣檢測3次，日間檢測5天，以各個成分與內標的響應值情況為對象分析相對標準偏差(RSD)。響應值按式(1)計算：
其中：fi為α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇與內標物茴香烯的響應值(分別對應於i=1、2和3)；Ai為檢測條件下α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇的峰麵積；Ao為檢測條件下內標的峰麵積；Ci為α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇的濃度，mg/mL；Co為內標物茴香烯的濃度，mg／mL。
（2）標準曲線及檢出限的測定
分別吸取2mL混標溶液於兩個10mL容量瓶中(分別記為l#和2樣瓶)，在2#瓶中加入2mL乙酸乙酯(此時1#瓶中標準溶液的濃度為2#瓶的2倍)，混勻後從中吸取2mL混合溶液至另一個10mL容量瓶(記為3#瓶)，在3#瓶中加入2mL乙酸乙酯(此時2#瓶中標準溶液的濃度為3#瓶的2倍)，按照上述方法進行5次梯度稀釋，共得到7個不同濃度的溶液，然後分別在不同梯度的標準溶液中加入2mL內標溶液，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻待用。
根據S／N=3(即信號與噪聲平均功率的比值為3)計算檢出限。
（3）加標回收率的驗證
已知一個杉木油樣品中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的質量分數含量分別為32.37％、7.65％和10.26％，準確稱取一定量該樣品分別置於25mL和10mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，分別作為被加標樣品和加標溶液。分別準確移取被加標樣品4、3和2mL於10mL容量瓶中，各加入lmL加標溶液以及2mL內標溶液，然後用乙酸乙酯稀釋至刻度，在實驗的色譜條件下計算加標回收率。
4、內標法與麵積歸一化法檢測結果的對比
選同一杉木油樣品，在實驗的色譜條件下進行檢測，分別用內標法和麵積歸一化法計算其α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的含量。內標法和麵積歸一化法計算公式分別見式(2)和式(3)。
式中：Xj為樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的含量(分別對應於i=1、2和3)，％；Aj為樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的峰麵積；A1為樣品溶液中內標的峰麵積；αj為α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇標準曲線的斜率；bj為。α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇標準曲線的截距；C1為樣品溶液的內標濃度，mg／mL；D為樣品定容後的體積(也即樣品的稀釋倍數)，mL；m為樣品的稱樣量，g。
式(3)中：Xj為樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的含量(分別對應於i=1、2和3)，％；Aj為樣品溶液中相應組分的峰麵積；A為將內標和溶劑空白扣除後，樣品溶液中所有檢出峰麵積的總和。
二、結果和討論
1、內標法檢測的驗證分析
（1）峰的分離情況
圖1和圖2分別為標準溶液和樣品溶液中α-柏木烯、β-柏木烯、柏木醇與茴香烯的氣相色譜圖。
由圖可知，在本實驗建立的色譜條件下，內標物茴香烯的峰不與目標成分α-柏木烯、β-柏木烯和柏木醇的峰重疊，並且各目標成分的峰之間分離度較好。
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