三、丹参大孔實驗結果
1、树脂不同條件提取丹參酮純度結果
通過表1發現當用85%的优化醇在70℃回流提取丹參粉3h後旋蒸、離心得到粗提物,工艺用80%乙醇洗脫後經高效液相色譜儀測得丹參酮提取率為94.96%,及其究該條件為最佳優化條件。抗疲
2、劳活大孔樹脂的性研篩選
大孔樹脂有吸附迅速、選擇性好、丹参大孔操作簡單、树脂綠色環保等優點,优化廣泛應用於提取優化天然產物。工艺不同類型的及其究樹脂由於孔徑、極性、抗疲比表麵積和對丹參酮的劳活吸附、解吸附能力各不相同,且被吸附材料包含化合物的複雜性對樹脂吸附率也有很大影響。
由表2可見,D-201和AB-8的吸附量、吸附率、解析率比D-101的低且具有顯著性差異(p<0.05),D-290和D-301雖然吸附率很高但解析率過低,尤其是D-290。綜合以上因素,選擇D101樹脂進行接下來的實驗。
3、吸附劑和上樣濃度對吸附率的影響
由圖1得當提取物溶於不同濃度乙醇時,其吸附率有明顯差異,在吸附劑為55%乙醇時樹脂對丹參酮的吸附效果最好,因此選擇55%乙醇為最佳吸附劑。將提取物溶於55%乙醇上樣,上樣濃度分別為2mg/mL~10mg/mL,由圖2得當上樣濃度在2、4、6mg/mL時的丹參酮泄露過多,樹脂過早達到穿透點,易造成樣品浪費;而濃度為10mg/mL時泄漏量較低,效果最好。
4、解吸液濃度對解吸率的影響
由圖3知隨著解吸液濃度提高,解析率先增大後減小,在解吸液濃度80%時達到最高,所以因此在洗脫中選擇80%乙醇進行洗脫。
由圖4得,解吸速度為1.0、2.0、3.0BV/h時,解吸率高於75%,而解吸速度為4.0、5.0BV/h時解吸率顯著降低。這是因為用一定量的乙醇解吸,如果解吸速度過大,會因為有效成分被樹脂吸附,卻沒有充足時間完全溶於乙醇而造成解吸率較低;而當解吸速度過低時,雖然解吸率高,但解吸用時較長且效率太低,還會因為流出的解吸液不夠集中而出現拖尾現象。所以,最佳解吸速度為3.0BV/h。
5、各組小鼠負重遊泳時間結果
通過表4發現,各組小鼠負重遊泳時間差異有統計學意義(p<0.05)。陽性對照組與空白組比較,顯著增長負重遊泳時間(p<0.05),丹參酮低劑量組與空白組相比沒有顯著性差異,而中劑量組和高劑量組與空白組、陽性對照組相比有顯著性差異,說明丹參酮在一定程度上促進了小鼠負重遊泳,提高了小鼠的耐力。
6、各組小鼠抗疲勞指標測定結果
從表5可以看出,小鼠的血清尿素氮含量結果中,丹參酮中、高劑量組相比於空白組有明顯降低且具有顯著性差異(p<0.05);肝糖原含量的結果中,丹參酮高劑量組較空白組具有顯著的差異(p<0.05),而陽性對照組和丹參酮低、中劑量組較空白組沒有顯著性增長(p>0.05)。小鼠血清乳酸的含量中,丹參酮中劑量組相比於空白組有顯著性的降低(p<0.05),丹參酮高劑量具有極顯著效果(p<0.01)。以上實驗數據說明丹參酮具有一定的抗疲勞功效。
四、結論
疲勞是機體的一個複雜生理生化變化的過程,若長期疲勞得不到緩解,還會發展為慢性疲勞,危害人身心健康。研究表明,丹參提取物具有明顯的抗疲勞、抗氧化作用,但是目前丹參酮的提取率不高。故本實驗對丹參酮的抗疲勞功效進行研究,並對提取分離過程進行優化。
本實驗對5種大孔樹脂進行篩選,選擇D101大孔樹脂作為最優樹脂來優化丹參酮的提取工藝,並對優化過程中吸附劑、上樣濃度、解吸液濃度、上樣流速進行篩選。研究結果表明,用85%的醇在70℃回流提取3h後旋蒸、離心得到粗提物用55%乙醇溶解上樣,上樣濃度為10mg/mL,用80%乙醇以3BV/h速洗脫12BV得到丹參酮,經高效液相測得純度為94.96%。
動物實驗結果表明,丹參提取物丹參酮可以明顯延長小鼠負重遊泳時間。當在耐力運動時會消耗大量能量,肝糖原首先分解入血,避免低血糖引起中樞神經係統疲勞感。本實驗顯示注射丹參酮可以增加小鼠肝糖原含量,延緩產生的疲勞。當劇烈運動時,機體蛋白質和氨基酸的分解代謝明顯增強,同時生成尿素,而血液內的尿素氮含量與疲勞程度、負荷量大小、機體功能成正相關。本實驗表明,注射丹參酮可顯著降低小鼠血清尿素氮和血乳酸的含量,減少蛋白質分解供能,提高機體運動能力。
綜合實驗數據得知,丹參酮的抗疲勞功效顯著,同時對其提取分離工藝進行了優化發現純度有明顯提升。但是對於抗疲勞作用還沒有進行深入研究探討,因此在後續實驗中要進一步研究。
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