紅參,红参五加科植物,多糖对小的研其性溫、鼠抗味甘、氧化香味較濃。红参紅參相比於人參組織更加致密,多糖对小的研更利於保存。鼠抗紅參,氧化是红参一種既可食用,又可藥用的多糖对小的研植物,具有廣泛的鼠抗應用和開發前景。紅參中主要活性成分為皂苷和多糖。氧化長期以來,红参對紅參的多糖对小的研研究一般都集中在人參皂苷上,忽略了紅參多糖活性成分的鼠抗功效。關於紅參多糖的研究集中在提取條件的優化以及生物活性方麵,研究表明,紅參多糖具有抗腫瘤、抗氧化、提高免疫力、調節血脂和血糖、抗炎等作用。目前,對於紅參多糖的體內抗氧化能力研究較少。人與外界持續接觸,包括呼吸,外界汙染,放射線照射等因素,在人體內產生自由基。研究表明,癌症、衰老等其他疾病與過量的自由基的產生有關聯。抗氧化係統是可與免疫係統比擬的,具有完善和複雜功能的係統,抗氧化能力越強,人體越健康。此次實驗以紅參多糖(redginsengpolysaccharidesRGPs)為研究對象,通過比較正常對照組小鼠與RGPs低、中、高劑量組小鼠髒器係數,血清和肝、腎、脾組織中MDA含量、SOD和GSH-Px活力,研究RGPs對小鼠的體內抗氧化活性,為RGPs今後的進一步開發利用提供依據。
一、材料與方法
1、材料與試劑
紅參:購自吉林省長白縣。
RGPs製備方法:紅參粉末,加入適量蒸餾水,超聲提取。離心(4000r/min,10min),取上清,sevag法脫蛋白,然後濃縮,透析溶液,80%乙醇醇沉靜置,過濾離心後幹燥得紅參多糖。采用苯酚-硫酸法,測得RGPs的多糖含量為67.83%。
普通昆明小鼠(體重量20~35g),購於黑龍江中醫藥大學;無水乙醇、正丁醇、三氯甲烷、冰醋酸等(分析純),蛋白定量、丙二醛、超氧化物歧化酶和穀胱甘肽過氧化物酶測定試劑盒,南京建成生物工程研究所。
2、儀器與設備
電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司型號:E-10D),恒溫水浴鍋(上海申勝生物技術有限公司型號:W202B),紫外分光光度計(美國Varian公司型號:Cary100),小型高速冷凍離心機(Saitexingyi離心機儀器有限公司型號:TGL-16M),小型高速常溫離心機(上海安亭科學儀器廠型號:TDL-80-2C),酶標儀(美國伯樂),旋渦混勻器(上海梅香儀器有限公司型號:ZW-A),組織勻漿機(寧波新芝科器研究所型號:DY89-I),電熱恒溫鼓風幹燥箱(昆山一恒儀器有限公司型號:DHP-9012)。
3、方法
(1)動物分組及劑量
小鼠適應喂養後隨機分為4組:正常對照組(0.9%生理鹽水,0.2mL/d)、RGPs低劑量組(100mg/kg,0.2mL/d)、RGPs中劑量組(200mg/kg,0.2mL/d)、RGPs高劑量組(400mg/kg,0.2mL/d)。每組8隻,連續灌胃30d,自由攝食飲水。
(2)指標測定
小鼠禁食24h,取眼球血,離心(4℃,3000r/min,離心10min),取上清液,待測。處死小鼠,解剖取肝、腎、脾用冷生理鹽水漂洗,濾紙擦拭幹淨,稱重。計算髒器指數。肝、腎、脾分別用生理鹽製備成10%勻漿,保存於-20℃待測。按照試劑盒說明測定血清和肝、腎、脾組織中MDA含量、SOD和GSH-Px活力。
髒器指數(mg/g)=器官質量/小鼠體質量
(3)數據處理
實驗數據采用SPSS軟件處理,用平均值±標準差表示結果,P<0.05為顯著差異。
二、結果與分析
1、RGPs對小鼠肝、腎、脾指數的影響
實驗可以通過髒器指數一定程度上反映灌胃RGPs後對小鼠器官的影響,進而初步分析RGPs的毒副安全性。由表1可知,連續灌胃30天後,與正常對照組相比,RGPs對小鼠肝指數、腎指數和脾指數均沒有顯著性差異(P>0.05),說明灌胃RGPs不影響小鼠的肝髒、腎和脾。
3、RGPs對小鼠血清及各組織MDA含量的影響
MDA是膜脂過氧化過程中最重要的產物之一,可通過測定MDA的含量,了解膜脂過氧化和膜係統受損程度。從表2可以看出,與正常對照組相比,RGPs3個劑量組均可降低血清和各組織中MDA的含量,其中RGPs高劑量組對血清和肝、腎、脾中MDA的含量分別降低了12.8%、40.23%、45.63%和39.34%。紅參多糖3個劑量組連續灌胃小鼠30天後,RGPs低劑量組可降低血清和肝組織MDA含量,但無顯著差異,對其他組織中MDA含量的降低具有差異顯著性。RGPs中、高劑量組均能顯著降低血清和各組織中MDA的含量。RGPs不同劑量組對降低腎組織中的MDA含量無顯著差異。這可能是RGPs具有穩定細胞膜結構,抑製了脂質進行過氧化反應。表明RGPs能夠穩定細胞膜結構,抑製小鼠體內的脂質過氧化過程,從而減輕自由基對機體損傷的程度。
2、RGPs對小鼠血清及各組織SOD活力的影響
SOD是機體內天然存在的超氧自由基清除因子,它可以把有害的超氧自由基轉為過氧化氫,然後過氧化氫酶和過氧化物酶將其完全分解為無害的水,因此SOD在細胞免受氧化損傷的過程中起了重要作用。從表3可以看出,RGPs3個劑量組均可提高血清和各組織中SOD的活性,並呈現劑量關係,其中RGPs高劑量組對血清和肝、腎、脾中SOD的活性分別提高了14.86%、20.6%、30.71%和36.08%。連續灌胃小鼠30天後,與正常對照組相比,RGPs低劑量組使血清中SOD的活性提高,無顯著差異,對組織中SOD活性提高具有差異顯著性。RGPs中、高劑量組均能顯著提高血清和各組織中SOD的活性。RGPs中、低兩個劑量組對提高肝組織中的SOD活性無顯著差異。
4、RGPs對小鼠血清及各組織GSH-Px活力的影響
GSH-Px是生物體內廣泛存在的抗氧化酶之一,能夠阻斷活性氧自由基對機體的進一步損傷,使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物,是生物體內重要的活性氧自由基清除劑。從表4可以看出,RGPs3個劑量組均可提高血清和各組織中GSH-Px的活性,並呈現劑量關係,其RGPs高劑量組對血清和肝、腎、脾中GSH-Px的活性分別提高了39.18%、38.25%、24.37%和59.22%。小鼠灌胃30天後,與正常對照組相比,RGPs低劑量組顯著提高血清和肝、腎組織中GSH-Px的活性,對脾組織中GSH-Px的活性提高無顯著差異。RGPs中、高劑量組均能顯著提高血清和各組織中GSH-Px的活性。RGPs中、低兩個劑量組對血清中的GSH-Px的活性提高無顯著差異。
三、結論
通過RGPs對小鼠體內抗氧化活性的硏究可知,RGPs能顯著降低血清和肝、腎、脾組織中MDA的含量,並提高SOD和GSH-Px的活力,且呈現明顯的劑量關係。表明RGPs具有較好的清除體內過多自由基的作用,從而防止自由基氧化對機體導致的損傷,進而起到抗氧化作用。因此,RGPs具有一定的體內抗氧化能力,為RGPs今後的開發利用提供科學依據。
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