多元低壓梯度洗脫是高效目前采用的主要控製模式。目前還有一種被稱為親水相互作用色譜法(hydrophilicinteractionliquidchromatography,液相HILIC),色谱是高效一種采用極性固定相、以高濃度極性有機溶劑和低濃度水溶液為流動相的液相色譜分離模式,能提高質譜檢測的色谱靈敏度。水是高效強洗脫劑,加大乙腈比例可使極性組分保留值加大,液相適於分析極性化合物或極性代謝物。色谱親水相互作用液相色譜法的高效梯度洗脫和反相模式相反,亦被稱為反反相色譜技術,液相其保留機製與正相色譜類似;初始條件包括高比例有機相,色谱典型的高效比例為95%乙腈,然後逐步提高水相的液相比例。
低壓梯度洗脫隻需要一個高壓泵,色谱而高壓梯度洗脫就需要多個高壓泵。低壓梯度洗脫時流動相的配比通過比例閥控製,硬件投入成本降低,但是提高了對流動相脫氣的要求。高壓梯度洗脫技術在高效液相色譜技術中已逐漸被淘汰。
在農藥殘留分析過程中,單殘留分析多采用等度洗脫,多殘留分析通常需要采用梯度洗脫技術。
2、進樣係統高效液相色譜通常由手動六通進樣閥或自動進樣器組成。
通過進樣係統可以實現取樣和進樣兩個目的。進樣就是將淨化好的待分析樣品溶液送入色譜柱的一種裝置。對進樣係統的要求是:進樣重複性好,進樣時對分離係統的壓力、流量影響小;樣品在進樣閥處不得因漏出、吸附、滲透而損失;取樣時不能將氣泡帶入定量管。高效液相色譜法進樣難度較大,主要原因是係統處於高壓狀態。在液相色譜法中,有3種進樣技術:直接注射器進樣、停流進樣和閥進樣。前兩種技術由於壓力過高或對分離有影響已經很少采用。目前把樣品引入色譜柱中主要是通過六通進樣閥。進樣閥內裝有定量管,樣品溶液在常壓下靠進樣器注入定量管,並把管中的流動相頂出,再轉動閥門,在保持高壓不停狀態下,將處於常壓狀態下的樣品送入高壓流路係統。進入分離係統的樣品量控製有兩種方式,一種是利用定量管切入(10μL、20μL、50μL、100μL),另一種是通過進樣器。當采用定量管時,通常需要注入5~10倍定量管體積的樣品量,保證閥體中的流動相被驅趕徹底。當采用進樣器定量時,定量管的體積要比進樣量大。通過更換大體積定量管獲得較低定量限,要注意的是定量管的體積與分析色譜柱的內徑成正比。定量管的體積不宜過大,否則每次進樣時係統壓力波動較大,峰形很差。非全量注入方式定量的重現性一般較差。
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