樺剝管菌隸屬於真菌門、响应性研擔子菌亞門、面法層菌綱、优化非褶菌目、超声多孔菌科、辅助剝管菌屬，桦剥化活又稱為樺多孔菌、管菌樺滴孔菌或樺孔菌，多糖是及其究樺木屬樹木專有性木腐菌。其形態特征：子實體中大型(最大直徑可達30cm)，抗氧無柄或幾乎無柄，响应性研上部為扁半球形，面法下部為扁平形，优化生長初期為汙白褐色，超声後期為褐色。辅助表麵有一層褐色的薄薄的表皮，撕去後可露出白色的菌肉，邊緣內卷(圖1，照片由延邊華夏桑黃菌業有限公司提供)。菌肉很厚實，近肉質且口感滑嫩，經過晾曬脫水後，菌肉會成為較輕的革質狀。樺剝管菌分布地區廣泛，陝西、福建、安徽、黑龍江、吉林、遼寧、內蒙古、甘肅、四川、雲南、貴州、新疆、西藏、河南、湖南等地區。
樺剝管菌既是能夠高效地降解木質纖維素的褐腐菌，也是一種實用真菌與藥用真菌。樺剝管菌多糖是樺剝管菌的主要活性成分之一，具有消炎、抑菌的功能，同時，樺剝管菌多糖具有“二抗作用”，即抗病毒和抗癌作用。目前，國內外對樺剝管菌的降解木材能力以及提取物的研究較多，而有關研究和應用樺剝管菌多糖的報道較少，樺剝管菌為一年生真菌，產量高且在我國儲量豐富，本研究以樺剝管菌子實體幹品為實驗材料，采用響應麵法優化樺剝管菌多糖超聲輔助提取工藝，通過單因素實驗和Box-Behnken(BBS)實驗，確定樺剝管菌多糖最佳提取工藝條件，並對其進行抗氧化活性研究，以期為樺剝管菌的開發、研究與利用提供科學的理論依據。
一、材料與方法
1、材料與試劑
樺剝管菌子實體幹品，2017年11月購於延邊華夏桑黃菌業有限公司。
葡萄糖、苯酚、濃硫酸、硫酸亞鐵、水楊酸、H202、抗壞血酸(VC)、1-1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)、95％乙醇，以上試劑均為分子純。
2、儀器與設備
實驗所用儀器、設備如表1所示。
3、方法
（1）樺剝管菌多糖的提取工藝流程
樺剝管茵子實體幹品→烘幹至恒質量→樺剝管茵粉→取19樺剝管茵粉加水調配液料比→水浴提取→超聲波處理→離心→稀釋100倍→苯酚→硫酸法顯色→490nm測定吸光值。
（2）葡萄糖標準曲線的繪製
精密稱取105℃、4h烘幹至恒重的葡萄糖50mg定容於500mL容量瓶中，配成0.1mg/mL的葡萄糖標準溶液。分別精密移取葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、lmL於大試管中，補加蒸餾水至1.0mL。分別精密移取上述葡萄糖溶液1mL，分別加6％苯酚溶液0.5mL，濃硫酸2.5mL，震蕩搖勻，室溫放置10min後於490nm測定吸光值。
（3）樺剝管菌多糖含量及得率的測定
采用苯酚-硫酸法進行樺剝管菌多糖含量的測定。準確吸取樣品溶液lmL於試管中，分別加6％苯酚溶液0.5mL，濃硫酸2.5mL，震蕩搖勻，室溫放置10min後於490nm測定吸光值。根據測得的吸光值帶入標準曲線回歸方程，計算得樺剝管菌多糖濃度。再將多糖濃度帶入以下公式，計算樺剝管菌多糖得率：
樺剝管菌子實體多糖得率(％)=C×V×n/m×100％，其中，C是測得吸光度對應的濃度；V是提取液總體積；n是稀釋的倍數；m是樺剝管菌子實體粉末質量。
（4）樺剝管菌多糖提取單因素實驗
按工藝流程方法提取樺剝管菌多糖，選擇水浴溫度、超聲溫度、超聲時間、超聲功率、液料比進行單因素實驗，以樺剝管菌多糖得率為研究指標，考察各個因素對樺剝管菌多糖得率的影響。不同因素梯度條件見表2。
（5）超聲波輔提樺剝管菌多糖工藝的Box-Behnken響應麵實驗設計
基於單因素實驗結果，選擇水浴溫度(A)、超聲功率(B)、料液比(C)為自變量，樺剝管菌多糖得率(Y)為響應值，應用Design—Expert.V8.0.6軟件的Box-Behnken(BBD)實驗原理設計3因素3水平響應麵實驗，對超聲波輔提樺剝管菌多糖的工藝條件進行優化。實驗因素及水平設計表，見表3。
（6）羥基自由基清除力測定
根據H2O2與Fe2+作用產生羥基自由基，並使水楊酸顯色的方法測定羥基自由基清除能力。參照林琳的實驗方法並做適當修改。分別精確配製0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、4.0mg/mL、8mg/mL樣品多糖溶液，依次在試管中加入1.0mL的FeSO。溶液(9mmol/L)，1.0mL的不同濃度的樺剝管菌多糖溶液，1.0mL的H202溶液(0.03％)和1.0mL的水楊酸溶液(9mmol/L)。將反應液置於37℃水浴30min，在510nm處測定各反應液的吸光值。空白組的多糖溶液由蒸餾水代替。對照組用同等濃度的VC溶液代替多糖溶液。按照下式計算羥基自由基的清除率。
羥基自由基清除率(％)=(Ao-A)/Ao×100％，其中，Ao：空白組的吸光值；A：樣品組的吸光值。
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相關鏈接：二苯基-2-苦肼基，硫酸亞鐵，水楊酸，苯酚
