五味子屬木蘭科植物，味多其主要含有多糖類、糖均木脂素類、质酶三萜類、解提黃酮類以及揮發油等化合物。取工具有益氣生津、艺优收斂固澀、味多補腎寧心等作用。糖均此外，质酶五味子主要成分有保護中樞神經係統、解提抗菌、取工抗氧化應激、艺优抗腫瘤、味多抗衰老等作用。糖均
多糖是质酶由單糖通過糖苷鍵聚合形成的生物大分子，廣泛存在於植物、動物、微生物和藻類等，具有抗氧化、抗腫瘤、免疫調節、抗炎等多種藥理活性；多糖傳統的提取方法是熱回流提取，存在能耗高、時間長、效率低等不足；現代提取工藝有超聲提取、微波提取、酶解提取等；提取工藝的研究是多糖研究的基礎，它不僅影響提取的效率，而且會影響多糖的活性。
采用均質酶解提取法提取五味子多糖，與傳統浸提、回流等方法相比，均質提取法具有提取時間短、效率高、操作簡便、等優點，本實驗首次采用均質酶解法提取五味子多糖，在單因素的基礎上，采用響應麵法優化多糖提取工藝，為植物多糖的生產提供了一種高效、環境友好的方法，為五味子多糖在醫藥、健康食品等領域的廣泛應用提供了理論基礎。
一、材料與方法
1、儀器與材料
MH2000電子調溫電加熱套（北京化玻醫療器械有限公司），T10BS25分散機（德國IKA公司），FA16004N電子分析天平（上海箐海儀器有限公司），MULTIFUZESER高速離心機（ThermoFisher公司），RV10DS25旋轉蒸發儀（德國IKA公司），1601紫外分光光度計（北京北分瑞利分析儀器公司），FD-1E-50冷凍幹燥機（北京博醫實驗儀器有限公司），DC-1000A高速多功能粉碎機（浙江省武義鼎藏日用金屬製品廠），SU8000掃描電鏡（日本日立）；五味子購於長春農貿市場，果膠酶（500u/mg，上海騰躍生物技術有限公司），其他試劑均為分析純。
2、實驗方法
（1）五味子多糖的均質酶解提取
將幹燥後的五味子粉碎，依次用石油醚、90%的乙醇回流，除去色素、脂質類物質以及低聚糖和小分子物質，蒸發溶劑，得到預處理樣品。準確稱取預處理後的五味子3.0g，用液料比為25mL/g的果膠酶水溶液浸泡12h，在選定的條件下提取，然後以轉速為3500r/min離心15min，上清液減壓濃縮至一定體積，用95%乙醇在4℃條件下醇沉12h，沉澱冷凍幹燥得到粗多糖。提取後的殘渣晾幹，用掃描電鏡觀察其組織破壞程度。
（2）五味子多糖的熱回流提取
取一定量的預處理樣品，按照100mL/g溶劑原料比加入蒸餾水，浸泡12h，在96℃溫度下回流提取4h，將幹燥後的五味子粉碎，依次用石油醚、90%的乙醇回流，除去色素、脂質類物質以及低聚糖和小分子物質，蒸發溶劑，得到預處理樣品。準確稱取預處理後的五味子3.0g，用液料比為25mL/g的果膠酶水溶液浸泡12h，在選定的條件下提取，然後以轉速為3500r/min離心15min，上清液減壓濃縮至一定體積，用95%乙醇在4℃條件下醇沉12h，沉澱冷凍幹燥得到粗多糖。提取後的殘渣晾幹，用掃描電鏡觀察其組織破壞程度。得到回流提取粗多糖。提取後殘渣晾幹，用掃描電鏡觀察。
（3）葡萄糖標準曲線的繪製
準確稱取葡萄糖標準品加蒸餾水溶解、定容，配製成質量濃度0.1g/mL的葡萄糖標準溶液。
精密吸取葡萄糖標準液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置於25mL具塞試管中，加水至2.0mL，加入1.0mL5%苯酚溶液，最後加5.0mL濃硫酸，靜置5min，然後在40℃水浴中加熱30min，以試劑空白溶液為參比，在490nm波長處測定吸光度（Abs），用Abs對濃度C（mg/mL）回歸，製得標準曲線C=8.4939×Abs+0.152，其中R2=0.999，標準曲線如下如圖1。
計算公式如下：
多糖得率（%）=（V×C×F×W2/W3×W1）×100；
式中：C-由回歸方程計算所得的多糖的濃度（g/L），V-溶解W3定容後體積（L），F-換算因子；W1-原樣質量，W2-由W1提取的粗多糖的質量（g），W3-從W2中稱取用於分析測定的粗多糖的質量。
（4）單因素試驗
固定其他條件，分別以加酶量（0.01、0.02、0.04、0.05g）、提取時間（1、2、3、4、5min）、提取溫度（35、45、55、65、75℃）和均質轉速（8000、11500、14500、17500、20500r/min）作為變量，考查各因素對多糖提取得率的影響。
(5)BBD試驗和數據分析
選取提取溫度、提取時間和均質轉速三個因素為自變量，每個因素選取三個水平（表1），以多糖提取得率（Y%）為響應值，采用BBD試驗方案（表1）、響應麵優化提取工藝參數。利用Design-Expert8.0軟件進行數據統計分析。
二、結果與討論
1、單因素實驗
（1）提取時間對多糖提取得率的影響
準確稱取預處理樣品3.0g，以液料比25mL/g的1%果膠酶液浸泡6h，提取溫度45℃，均質轉速14500r/min時，分別考察提取時間1、2、3、4、5min對提取得率的影響，結果見圖2（a）。由圖2（a）可知，在1～2min內多糖提取得率隨時間的增加快速提高，2min時多糖提取得率達到最高值，之後隨時間的增加而降低。在1～2min時間範圍內隨時間的增加，組織細胞的破碎程度增加，胞內多糖的溶解、擴散的效率提高，提取
得率快速增加，且高速的剪切作用下，多糖的溶解和擴散均可在較短的時間內達到平衡，因此相對熱回流提取，均質酶解提取需要的時間非常短；2min後，可能是多糖的糖苷鍵及果膠酶的結構在強烈的剪切作用下被破壞，導致多糖提取得率減少。因此，提取的最佳時間範圍是1～3min。
（2）提取溫度對多糖提取得率的影響
準確稱取3.0g預處理樣品，以液料比25mL/g的1%的果膠酶液浸泡6h，提取時間2min，均質轉速14500r/min，分別考察溫度35、45、55、65、75℃對提取得率的影響，結果見圖2（b）。由圖2（b）可知，在35～45℃溫度範圍內多糖提取得率隨溫度增加迅速增加，在45℃時提取得率達到最大值，之後隨溫度增加快速降低。分析可能的原因是在一定溫度範圍內，隨溫度的升高酶活性增加、多糖在水中的溶解度增大，多糖的溶解和擴散速率增加，提取得率快速提高。而當溫度增加超過一定範圍內，隨溫度的增加，酶的活性降低，多糖的結構也可能隨溫度增加而發生變化，致使提取得率下降。因此，選作45℃為單因素的最佳溫度。
（3）均質轉速對多糖提取得率的影響
準確稱取3.0g預處理樣品，用液料比25mL/g的1%的果膠酶液浸泡6h，提取溫度45℃，提取時間2min時，考察均質轉速分別為8000、11500、14500、17500、20500r/min時對提取得率的影響，結果見圖2（c）。由圖2（c）可以發現，均質轉速在8000～14500r/min範圍內，多糖提取得率隨均質轉速數的增加而增加，當均質轉速為14500r/min時提取率最大，之後多糖提取得率隨轉速的增加緩慢下降。這可能是均質轉速數增加，對固體原料組織的破碎程度增加，單位質量的固體組織的比表麵積增加，溶劑與樣品的接觸更充分，多糖由組織內部向周圍溶劑的擴散速率加快，多糖的提取得率增加；均質轉速數較大時，多糖以及酶的結構可能被破壞，致使多糖提取得率出現緩慢降低。因此，最佳的均質轉速為14500r/min。
（4）果膠酶用量對五味子多糖提取得率的影響
準確稱取3.0g五味子，用液料比為25mL/g的不同濃度的果膠酶液浸泡6h，在提取溫度45℃，提取時間為2min，均質轉速14500r/min，分別考察果膠酶用量0.010、0.020、0.030、0.040、0.050g對五味子多糖提取得率的影響，結果見圖2（d）。由圖2（d）可知，在0.01～0.04g加酶量範圍內，多糖提取得率隨果膠酶加入量的增加提取得率由5.6%緩慢增加到6.6%，這可能是由於果膠酶量增加，酶解效果增加，提取得率增加；在加酶量為0.04g（1.33%）時，多糖提取得率達到最高，之後隨果膠酶量的增加而下降。加酶量過多時，可能會使多糖在果膠酶和強烈的剪切作用下，多糖被降解，使提取得率降低。但相對其他3個影響因素，加酶量對多糖得率影響相對較小，但加酶量對提取成本的影響較大。因此果膠酶的最佳加酶量為1.33%，且不再進一步優化。
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