維生素C又名抗壞血酸,蔬菜素是和水含量維持人體正常代謝的重要化合物,具有防治缺鐵性貧血、果中預防白內障和心血管疾病功能,维生稳定醫學研究表明,测定補充足夠的蔬菜素維生素C,可以提高人體免疫力,和水含量抗壞血病、果中預防感冒,维生稳定防治人體衰老,测定降低膽固醇等作用,蔬菜素特別是和水含量在預防肝炎和肝硬化有很好效果。維生素C按構型分為L型和D型,果中其中L型能參與體內各種抗氧化、维生稳定清除自由基等多種生理作用,测定對人體具有生物活性,而D型基本不參與人體生理作用,多為食品中抗氧化劑,在自然界極少存在。但是人體自身不能合成維生素C,必須從食物中獲取。蔬菜水果是人體攝入維生素的主要途徑,維生素C是水果蔬菜主要的品質指標之一,了解不同蔬菜水果及其貯存方式對蔬菜水果中維生素C的含量變化,為人類日常膳食獲取維生素C提供參考依據,讓人類有選擇性地攝入富含維生素C的蔬菜與水果,有益於人體健康。
維生素C測定的方法一般有化學法、比色法、紫外分光光度法、熒光法、液相色譜法等,而這些方法所需試劑較多、操作繁瑣、流動相複雜。試驗采用一種低濃度0.1%的草酸作流動相、ZORBAXSB-Aq柱分離的高效液相色譜法,分析蔬菜和水果及其保存方式對其維生素C含量影響,取得理想效果。
1材料與方法
1.1儀器與試劑
1.1.1儀器與設備
1260高效液相色譜儀(美國Aglent公司);電子天平(Quintix224-1CN,賽多利斯科學儀器(北京)有限公司);勻漿機(ARTMiccra,MICCRA);超純水機(GenpurePro,美國Thermo公司);落地式高速冷凍離心機(AvantiJ-30I,BeckmanCoulter)。
1.1.2試劑
維生素C標準對照品(純度99.90%);草酸(分析純)。
1.2試驗方法
1.2.1色譜條件
色譜柱ZORBAXSB-Aq(C18,4.6mm×150mm,5μm),流動相為0.1%草酸,流速1mL/min,柱溫30℃,檢測波長254nm,進樣量10μL。
1.2.2標準溶液配製
準確稱取維生素C標準品0.1g於小燒杯中,用0.1%草酸溶解,轉移至100mL棕色容量瓶中,稀釋至刻度,得到1mg/mL標準儲備液,儲備液在2~8℃避光條件下保存1周。用超純水將質量濃度1mg/mL標準儲備液稀釋成濃度500mg/L中間液。取適量中間液稀釋成質量濃度為0.5,1.0,5.0,25.0,50.0,125.0和250mg/L維生素C標準使用液,上機測定峰麵積,計算線性方程,外標法定量。
1.2.3樣品前處理
試驗所用蔬菜和水果購自附近農貿市場。
樣品處理:將蔬菜和水果洗淨,取適量樣品,放於組織勻漿機中勻漿,準確稱取25.00g樣品於50mL離心管中,用超純水清洗勻漿機,洗液一並轉入離心管中,用0.1%草酸溶液定容,搖勻後,90W功率超聲30min,在低溫(0℃)條件下以3000r/min離心5min,取上清液過0.45μm濾膜。
1.2.4回收率和精密度試驗
在基質溶液中加入維生素C標液,質量濃度分別為10和50mg/L,重複上機測定8次(每次進樣10μL),檢測維生素C色譜峰麵積,計算RSD值。
1.2.5貯存方式與維生素C含量關係試驗設計
購買當天采摘上市的番茄、辣椒、獼猴桃和草莓後立即測定其維生素C含量,所有番茄和辣椒隨機分成2組。第1組(散裝):散放在鏤空的塑料筐裏;第2組(保鮮膜包裝):用保鮮膜包裹。2組均存放在室溫(20℃)自然條件下保存。1周內每天分別測定每組番茄和辣椒果實的維生素C含量;獼猴桃和草莓隨機分為2組,第1組(室溫),散放在鏤空的塑料筐裏,第2組(冷藏),散放在0℃冰箱冷鮮保存。1周內每天分別測定獼猴桃和草莓的維生素C含量。
2結果與討論
2.1標準工作曲線
用0.1%草酸溶液配製質量濃度為0.5,1.0,5.0,25.0,50.0,125.0和250mg/L維生素C標準溶液,製作維生素C標準曲線。維生素C在0.5~250mg/L時,線性回歸方程為Y=28.1357X+11.8468,相關係數0.9999,根據3倍信噪比(S/N≥3)確定該方法檢出限為0.060mg/kg(接近空白樣品)。
2.2回收率和精密度試驗
分別在5.0,20和100mg/kg的樣品中加入5.0,20和150mg/kg維生素C標準溶液進行回收率試驗,每份樣品重複測定8次;結果見表1,從結果可知,其回收率在98.00%~105.60%之間,相對偏差為0.22%~2.48%。
2.3蔬菜和水果中維生素C含量測定結果
空白提取液、陽性樣及維生素C標準溶液的色譜圖如圖1所示。常見蔬菜水果樣品中維生素C含量測定結果見表2。美國科學學會認為,每人每天維生素C的最佳用量應為200~300mg,且不低於60mg。從表2可以看出,日常水果中,蘋果、梨、香蕉和葡萄很難滿足身體需求;有選擇地食用奇異果、鮮棗等維生素C含量高的水果,可以滿足維生素C需求;而蔬菜中大部分是能夠補充足夠的維生素C。
2.4不同貯存條件下蔬菜和水果中維生素C含量變化
從圖2包裝方式和貯存時間對番茄和辣椒維生素C含量有明顯影響,隨著貯存時間延長,番茄和辣椒的維生素C含量總體呈下降趨勢,番茄中維生素C含量隨時間減少速度快於辣椒維生素含量;從圖2可以明顯看出,包裝辣椒和番茄維生素C含量下降趨勢明顯小於散裝番茄和辣椒,這與魏春雁等對番茄中維生素含量研究一致。
從圖3可以看出,貯存溫度和時間對獼猴桃和草莓維生素C含量有明顯影響,隨著貯存時間延長,獼猴桃和草莓維生素C含量總體呈下降趨勢,0℃條件冷藏的獼猴桃和草莓維生素C明顯比室溫貯存的穩定性好,故0℃冷藏獼猴桃和草莓維生素C含量下降緩慢。
3結論
在流動相0.1%草酸溶液,上樣量10μL,流速1.0mL/min,檢測波長254nm,柱溫25℃,ZORBAXSB-Aq(C18,4.6mm×150mm,5μm)為色譜柱的色譜條件下,高效液相色譜可測定多種蔬菜和水果中維生素C含量,方法線性範圍寬、相關性好,峰形窄,靈敏度高,基質加標回收率高,分析中受樣品中其他雜質的影響較小,方法重複性和再現性好。維生素C及其不穩定容易損失,方法高效快速、簡便,克服其他方法過於複雜、前處理維生素C損失嚴重缺點,可作為大批量蔬菜和水果檢測維生素C含量的檢測方法,同時選擇包裝或冷藏保鮮可降低蔬菜和水果中維生素C含量損失率。
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