2.1.2 色譜柱的高效考察

由於葉綠素a和葉綠素b的檢測波長相近，為清楚考察色譜柱效果，液相選用波長445 nm檢測葉黃素，色谱素645 nm檢測葉綠素a和葉綠素b。法准選用商品化的确定C18-AQ柱和氰基柱分別對待測樣品進行分析，檢測結果表明，量微量植在氰基柱上分離3種色素的物体物色保留時間較長，分離度較高，中的重植如圖1所示，高效有利於葉綠素a、液相葉綠素b和葉黃素的色谱素定量檢測。

2.2 方法學考察

2.2.1 標準曲線及定量限

分別配製濃度為1.2.1所述的法准係列標準工作溶液，進樣後以不同濃度的确定峰麵積（平均值/10000）y為縱坐標，配製的量微量植標準品的質量濃度x（mg/L）為橫坐標，建立y-x標準曲線，物体物色計算回歸方程，結果如表1所示，根據信噪比S/N=3，測得各組分定量限和檢出限結果見表1。3種色素均在0.05～50 mg/L範圍內線性極佳（R2=0.9999）。

2.2.2 方法精密度

取3種色素的混合標準品，在相同條件下重複進樣測定6次。分別計算葉綠素a、葉綠素b以及葉黃素的峰麵積相對標準偏差（RSD），如表2所示。3種植物色素的峰麵積的相對標準偏差（RSD）均小於1%，表明方法的精密度良好。

2.2.3 方法穩定性

取同批綠葉碎片平行稱取3份，按1.2.2方法對樣品進行處理，於製樣後的2、6、10 h分別進樣分析測定3種色素的含量，測定日內精密度；連續3 d每天重複檢測試樣，測定日間精密度，結果示於表3。結果表明，試樣的日內及日間精密度均低於5%，表明該方法的穩定性和重現性良好。

2.2.4 回收率及精密度

對3份相近濃度的試樣精密量取900 μL，分別加入100 μL的標準溶液，每份樣品重複分析3次。采用外標法計算平均回收率及精密度，結果表明，葉黃素、葉綠素a和葉綠素b的加標平均回收率均在90%～110%之間，RSD <5%，滿足定量分析要求。

2.3 樣品測定

按1.2.2方法製備綠色植物葉片以及葉片根部樣品溶液各3份，分別按1.2.3方法重複分析3次，通過標準工作曲線計算植物葉片以及葉片根部樣品中葉綠素a、葉綠素b以及葉黃素的含量。圖2為實際植物葉片樣品的色譜圖（不同檢測波長下），其中3種植物色素與其標準品的出峰時間可以很好地吻合。計算結果表明，按所建立的方法檢測的植物葉片中葉綠素a、葉綠素b和葉黃素的含量分別為0.229、0.714、0.821 mg/g；檢測的植物葉片根部葉綠素a、葉綠素b和葉黃素的含量分別為0.058、0.089、0.146 mg/g。

3 結論

針對目前植物色素分析時間長，流動相體係較為複雜，且待測組分難以達到基線分離的現狀下，建立了準確測定植物葉片以及葉片根部中葉綠素a、葉綠素b以及葉黃素含量的反相高效液相色譜方法，可對植物體中重要的3種色素進行準確快速的分析。方法的線性關係、精密度、穩定性以及平均加標回收率等各項方法學參數均表明，該方法的靈敏度和準確度均符合實際樣品檢測過程中的要求。本研究方法的建立為植物中重要色素的定量提供了可靠、快速、準確的高通量分析方法。

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