2.2 定量分析方法

采用HPLC(1525-2707 TCM-2489色譜係統）、同步秃疮同分体柱型C18(250 mm×4.6 mm,测定5μm），流動相為甲醇-水洗脫體係，花中含量洗脫方法為：0～5 min用10%甲醇-水體係溶液平衡柱子，紫堇5～35 min由10%甲醇水溶液過渡到100%甲醇體係，丁碱進行10%甲醇-100%甲醇體係梯度洗脫，异构45～48 min由100%甲醇過渡為10%甲醇-水體係，同步秃疮同分体48～50 min用10%甲醇-水體係平衡柱子。测定上樣量1 m L，花中含量進樣體積10μL，紫堇每個樣品運行檢測時間為50min，丁碱柱溫30℃，异构檢測波長260 nm。同步秃疮同分体

2.3 醇提物和單體化合物的测定保留時間與峰值

圖1為10 g/m L禿瘡花乙醇提取液HPLC分析色譜圖，橫軸是花中含量保留時間（單位是min），縱軸是電信號（單位是Au）。在保留時間22 min時有高強度色譜峰。圖2為同一條件下紫堇丁堿和異紫堇丁堿的色譜圖，其保留時間與禿瘡花醇提物一致。

2.4 含量分析

單體化合物的含量計算方法：設單體化合物的濃度梯度，經HPLC分析，建立積分麵積與濃度之間關係的回歸方程、線性關係和保留時間（見圖5和表3）；將醇提物中該物質在某一濃度（如10 mg/m L）下的峰麵積（y）代入回歸方程，計算出該物質的質量濃度x(mg/m L）；將x帶入物質的含量計算公式，可得該單體化合物在原材料中的含量（注：根據前期試驗，提取率按照平均為17%進行計算）。禿瘡花中紫堇丁堿含量為0.79%、異紫堇丁堿含量為1.33%。

3 討論

利用峰麵積與單體化合物濃度之間線性回歸方程和物質的含量計算公式，計算出單體化合物在各自原材料中的含量。異紫堇丁堿占酸化氯仿相的48.9%，紫堇丁堿占酸化氯仿相的19.7%，兩者合計共占酸化氯仿相的68.6%；建立積分麵積與濃度之間關係的回歸方程，紫堇丁堿y=16 369 907.7x-393 024.811(R2=0.999 872 719），禿瘡花中紫堇丁堿含量為0.79%；異紫堇丁堿y=13 281 438.44x-36 671.693 15(R2=0.999 834 091），禿瘡花中異紫堇丁堿含量為1.33%。

4 結論

建立禿瘡花中紫堇丁堿和異紫堇丁堿的同步提取分離製備方法，采用HPLC研究藥用植物禿瘡花中分離得到的同分異構體在植物中的含量，並與粗提物保留時間對比定位，檢驗試驗工藝的可行性，初步建立HPLC同時測定生物堿的檢測方法。為進一步研究禿瘡花的藥理活性和構效關係提供試驗數據，為藥食同源植物中單體化合物含量的定量測定奠定試驗基礎和理論依據。

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