建立同時測定氫溴酸右美沙芬糖漿中主成分氫溴酸右美沙芬、雜質5-羥甲基糠醛及防腐劑苯甲酸、时测沙芬羥苯乙酯含量的定氢的含高效液相色譜方法。
色譜柱為PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，溴酸5μm），右美药和流動相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸二氫銨溶液，糖浆梯度洗脫，中主杂质體積流量為1.0mL·min-1，降解及防柱溫為30℃，法同腐剂檢測波長為279nm，时测沙芬進樣體積為20μL。定氢的含結果：氫溴酸右美沙芬、溴酸5-羥甲基糠醛、右美药和苯甲酸、糖浆羥苯乙酯的中主杂质線性範圍分別為29.21～876.2、1.94～58.29、27.08～812.4、5.85～175.4μg·mL-1（r≥0.9997）。4種成分的平均加樣回收率分別為99.23%、98.86%、100.3%、98.51%，RSD分別為1.03%、1.52%、1.11%、1.64%（n=6）。
該方法簡便、準確，可用於測定氫溴酸右美沙芬糖漿中氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的含量。
氫溴酸右美沙芬糖漿為中樞性鎮咳藥，可抑製延腦咳嗽中樞而產生鎮咳作用，長期服用無成癮性和耐受性。該藥現行質量標準為國家藥品標準WS1-（X-341）-2003Z，收載於《國家食品藥品監督管理局國家藥品標準新藥轉正標準》（第45冊），該標準中隻有主成分氫溴酸右美沙芬的含量測定，並未對雜質和防腐劑進行質量控製。
《中國藥典》2015年版四部規定糖漿劑中含蔗糖量應不低於45%，因此本品中含有高濃度的蔗糖，極易產生糖的降解雜質5-羥甲基糠醛（5-HMF）。5-HMF屬於2類遺傳毒性雜質，具有致突變性、致敏性和遺傳毒性等多種毒副作用。目前遺傳毒性雜質已成為藥品監管機構、製藥企業和醫療機構關注的焦點。
氫溴酸右美沙芬糖漿處方中還含有防腐劑苯甲酸或羥苯乙酯，防腐劑雖能夠抑製微生物在糖漿劑中生長和繁殖，但過量攝入對人體也會有一定的毒性，尤其是兒童用藥，如苯甲酸會損害神經係統、具有細胞毒性和致癌等。羥苯酯類影響男性生殖係統和誘發女性乳腺癌等，故有必要對氫溴酸右美沙芬糖漿中的降解雜質和防腐劑的含量進行質量控製。本研究建立HPLC法同時測定氫溴酸右美沙芬糖漿中的氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的含量，有利於提高本製劑的質量控製標準。
Waters2695高效液相色譜儀（含二極管陣列檢測器）；WatersEmpower色譜工作站；SartoriusBP211D型電子分析天平；KH-700DE型數控超聲波清洗器。
氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯對照品（純度分別為94.8%、99.2%、99.9%、99.9%，批號分別為100201-201204、111626-201912、100419-201703、100847-201604）；氫溴酸右美沙芬糖漿（廠家A，190202、190602、190802、200103，規格0.15%；廠家B，190205、190301、190411、190502，規格0.2%）；甲醇為色譜純；磷酸二氫銨、磷酸為分析純；水為超純水。
色譜柱：PhenomenexLunaC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-0.1mol·L-1磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加磷酸1mL，用水稀釋至1000mL）（B）；梯度洗脫（0～10min，15%A；10～11min，15%A→50%A；11～26min，50%A；26～27min，50%A→15%A；27～35min，15%A）；檢測波長：279nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL·min-1；進樣體積：20μL。
分別精密稱取氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸、羥苯乙酯對照品適量，用甲醇-水（1∶1）溶解配製成1.4604、0.09715、1.3540、0.2924mg·mL-1的混合對照品儲備液；精密量取該儲備液2mL，置10mL量瓶中，甲醇-水（1∶1）定容至刻度，搖勻，製成每毫升分別含上述成分0.2921、0.01943、0.2708、0.05848mg的混合對照品溶液。
精密量取供試品5mL，置25mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）適量，超聲處理10min，使溶解並稀釋至刻度，搖勻，濾過即得。
以溶劑甲醇-水（1∶1）作為陰性樣品溶液。
取上述混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果見圖1。
檢測表明，5-羥甲基糠醛、苯甲酸、氫溴酸右美沙芬、羥苯乙酯均能達到基線分離，待測成分色譜峰的理論塔板數均大於3000，各成分之間無幹擾，證明該方法專屬性良好。
精密量取混合對照品儲備液0.2、0.5、1、2、4、6mL，分別用甲醇-水（1∶1）定容於10mL量瓶中，搖勻，即得係列混合對照品溶液。按“2.1”項的色譜條件對上述係列混合對照品溶液進行測定，並繪製出橫、縱坐標分別為質量濃度（μg·mL-1）和峰麵積（Y）的標準曲線，得氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯的回歸方程及線性範圍（n=6），分別為Y=6.6002×103X-2.2593×104（r=0.9998，29.21～876.2μg·mL-1）；Y=1.3768×105X-3.2880×104（r=0.9997，1.94～58.29μg·mL-1）；Y=7.3378×103X-1.8058×104（r=0.9998，27.08～812.4μg·mL-1）；Y=3.2497×104X-2.3063×104（r=0.9997，5.85～175.4μg·mL-1）。
取混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，連續進樣6次，記錄峰麵積，結果氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯峰麵積的RSD分別為0.32%、0.46%、0.26%、0.37%，表明儀器精密度良好。
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