(2)單因素試驗結果分析
①膽固醇與卵磷脂質量比對包封率的超临影響分析
膽固醇:磷脂(W:W)對脂質體包封率的影響如圖2所示,增加膽固醇用量,法优方工脂質體包封率增加,化番當膽固醇:磷脂(W:W)=9:20時,茄红脂質體包封率達到峰值。素脂繼續增加膽固醇的质体用量,脂質體包封率降低。超临這是法优方工由於膽固醇具有兩親性,增加膽固醇用量,化番可以在一定程度上提高脂質體的茄红穩定性。此外,素脂膽固醇與磷脂具有較好的质体相容性,可以改善磷脂雙分子層膜的超临流動性和通透性。以免雙分子層過於緊密,法优方工難包埋。化番此外,膽固醇的嵌入增加了雙分子層的表麵積,易於番茄紅素的包埋。但膽固醇用量過高時,雙分子層的剛性增大,表麵積變小,不易包埋芯材。
②緩衝溶液pH對包封率的影響分析
pH對脂質體的包封率如圖3所示,pH為7.0時,脂質體包封率達到峰值,繼續升高pH,脂質體包封率下降。這是因為pH影響脂質體表麵電荷,電荷的改變會影響脂質體的結構穩定性。脂質體雙分子層變得疏鬆,孔徑變大,使所載藥物溶液滲透出來,從而影響芯材的包埋。
③番茄紅素與卵磷脂質量比對包封率的影響分析
番茄紅素:磷脂(W:W)對脂質體包封率的影響如圖4所示,脂質體包封率隨著番茄紅素:磷脂(W:W)的增大,先增大後減小。番茄紅素:磷脂(W:W)為1:50時,包封率達到峰值。繼續增加番茄紅素用量,包封率下降。當番茄紅素含量較低時,脂質體有足夠的空間對其進行包埋。由於脂質體的載藥空間有限,當番茄紅素增加到一定程度時,脂質體囊泡空間飽和,藥物無法再繼續被包埋,所以包封率下降。
(3)響應曲麵試驗結果分析
①響應曲麵試驗設計及結果
根據單因素實驗結果,以包封率為指標值,按照Box-Benhnken試驗設計原理進行3因素3水平的響應麵優化試驗,試驗設計及結果如表2所示。
②方程建立及方差分析
對試驗數據進行擬合,得到包封率(Y)對膽固醇:卵磷脂(W:W)(A),緩衝溶液pH(B)番茄紅素:卵磷脂(W:W)(C)的二次多元回歸方程為
Y=81.02+13.73A+6.04B+02.93C-10.83AB-5.83AC-6.53BC-11.17A2-9.02B2-18.17C2。
模型方差分析如表3所示,P<0.0001<0.01,說明模型極顯著,失擬項不顯著,說明模型擬合程度高。模型各係數顯著性檢驗如下:A<0.0001<0.05,B=0.0009<0.05,C<0.0393<0.05,說明膽固醇與磷脂質量比、緩衝溶液pH、番茄紅素與卵磷脂質量比對包封率影響均顯著。
③交互作用分析
響應曲麵交互作用如圖5至圖7所示。
LY:PC(W:W)和緩衝溶液pH,CH:PC(W:W)和LY:PC(W:W),CH:PC(W:W)和緩衝溶液pH對包封率的3D圖均呈拋物線狀,等高線圖呈橢圓狀。即LY:PC(W:W)和緩衝溶液pH,CH:PC(W:W)和LY:PC(W:W),CH:PC(W:W)和緩衝溶液pH的交互作用對包封率都有顯著影響。LY:PC(W:W)和緩衝溶液pH交互作用的3D圖較陡,且等高線密集。說明LY:PC(W:W)和緩衝溶液pH交互作用對包封率的影響更顯著,即LY:PC(W:W)和pH對包封率影響更明顯。
(4)驗證試驗結果分析
模型預測的最優的實驗條件為膽固醇與卵磷脂質量比為9:20,pH為6.99,番茄紅素與卵磷脂質量比為1:50。為了實際試驗條件更易於控製,選擇膽固醇與卵磷脂質量比為9:20,pH為7,番茄紅素與卵磷脂質量比為0.02:1。進行三次平行試驗,得平均包封率為83.43%±1.15%。采用SPSSl7.0進行單樣本t檢驗,t=-2.720,P(雙側)=0.113>0.05,說明與預測值85.24%相比無顯著性差異。表明模型擬合程度高,驗證了模型的可靠性。
與目前工業上使用較多的薄膜超聲法、高壓均質法、乙醇注入法等方法相比,超臨界CO2法製備番茄紅素脂質體減少了有機溶劑的加入,操作條件溫和,且操作簡單易行。因此製得脂質體含有較少的對人體有害的物質,製備出的脂質體結構更加穩定。整個過程無汙染物排放,更符合現代化工業生產的要求。番茄紅素脂質體能在很大程度上改善番茄紅素溶解度低,穩定性差的弊端。對超臨界法製備番茄紅素脂質體的配方組成進行優化,能提高番茄紅素脂質體包封率及穩定性,為製備更符合工業化生產及人體健康,有助於人體消化吸收的脂質體供了新的解決方法。
此外還為番茄紅素應用開發提供了理論依據和實驗基礎。助於人體消化吸收的脂質體供了新的解決方法。此外還為番茄紅素應用開發提供了理論依據和實驗基礎。
三、結論
試驗以番茄紅素脂質體包封率為指標,采用超臨界CO2法進行番茄紅素脂質體的製備。根據單因素試驗及響應曲麵設計的結果,對超臨界法製備番茄紅素脂質體的配方組成進行優化。結果表明,番茄紅素脂質體的最佳配方組成參數為:膽固醇與磷脂質量比為9:20,磷酸鹽緩衝pH為7.0,番茄紅素與磷脂質量比為1:50,此條件下得到番茄紅素脂質體的包封率為:83.4%±1.15%。
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