止血粉在37℃水中溶解度小,微孔外生物降呈混懸液。多聚100℃加熱5min後,糖止分成上下兩層,血粉析上層溶液澄清,成分下層少量止血粉呈現溶脹狀態。及体解分此外,微孔外生物降若酶解產物的多聚保留時間為7.7min,說明產物為葡萄糖;若酶解產物的糖止保留時間為16.1min,說明產物為麥芽糖;保留時間為14.5min為α-澱粉酶中乳糖;其他保留時間的血粉析酶解產物為不同聚合度的寡糖。降解產物中葡萄糖、成分麥芽糖和乳糖的及体解分離子色譜峰麵積見表2,降解產物中葡萄糖含量見表3,微孔外生物降降解產物中麥芽糖的多聚含量,如表4所示;止血粉α-澱粉酶降解不同時間後產物中未降解澱粉含量,糖止如表5所示。
因此,止血粉在37℃α-澱粉酶作用下,澱粉含量隨著降解時間延長逐步減少,從即時的95.6%至48h的8.0%,1h內降解速率最大,約降解了67.3%。降解產物中除有葡萄糖單糖、麥芽糖雙糖外,還有寡糖;離子色譜圖中乳糖為α澱粉酶中物質,在降解的48h乳糖含量保持不變。100×10-6止血粉在37℃α-澱粉酶作用下,葡萄糖的含量從即時的0至48h的4.004×10-6,麥芽糖的含量從即時的0ppm至48h的44.692×10-6,1h內麥芽糖生成速率最大,增加了36.509×10-6。
本研究是按照《可吸收止血產品注冊技術審查指導原則》要求,在體外研究微孔多聚糖止血粉的成分以及生物降解,分別利用酸降解和生物降解法對微孔多聚糖止血粉進行體外降解研究。通過離子色譜法體外測定三氟乙酸降解微孔多聚糖止血粉生成的單糖,從而確定了止血粉的成分。隨後采用離子色譜和分光光度法測定該止血粉在37℃、pH=6.9和Ca2+存在條件下,經過α-澱粉酶作用後所產生的葡萄糖,麥芽糖和澱粉含量,進一步確定止血粉的生物降解特性。在酸降解止血粉過程中,由於澱粉是葡萄糖分子聚合而成的,因此澱粉又被分為直鏈澱粉和支鏈澱粉兩大類型。直鏈澱粉沒有分支的螺旋結構,支鏈澱粉具有24~30個葡萄糖殘基以α-1,4-糖苷鍵首尾相連而成,在支鏈處為α-1,6-糖苷鍵。所以經過酸降解後,能夠形成單糖結構。本次所采用三氟乙酸降解止血粉的結果也表明得到的單糖皆為葡萄糖,且葡萄糖的含量為(54.3±1.5)×10-6,且澱粉中單糖為葡萄糖的含量為97.8%±2.6%。
在進行體外酶降解止血粉時,主要選用了血清澱粉酶,也被稱之為澱粉內切酶,這是一種α-澱粉酶,在生物體內主要是由胰腺和唾液腺分泌。相關研究表明,α-澱粉酶從人唾液和豬胰腺中得到的α-澱粉酶的最適pH為6.0~7.0。此外,α-澱粉酶以Ca2+為必需因子並作為穩定因子,既可以作用於直鏈澱粉,又能夠作用於支鏈澱粉,可以無差別地切斷α-1,4-鏈。其特征主要是能夠引起澱粉溶液黏度的急劇下降和碘反應的消失,最終分解直鏈澱粉時產物以麥芽糖為主,此外,還有麥芽三糖及少量葡萄糖;分解支鏈澱粉時,產物除麥芽糖、葡萄糖外,還生成分支部分具有α-1,6-鍵的α-極限糊精。止血粉在經過48h的體外α-澱粉酶的作用之後,所含澱粉含量逐漸降低,1h之內澱粉降解速率最大為67.3%,生物降解產物中除了含有單糖葡萄糖以外,還含有雙糖麥芽糖以及少許寡糖分子。並且麥芽糖含量在1h之內的增加速率最大為81.69%。
對於此類微孔多聚糖止血材料的生物降解性研究也較多,Rong等對一種新型的止血栓塞複合生物材料可降解止血劑凝血酶負載的海藻酸鈣微球(TACMs)進行研究,結果表明其可以在體內生物降解並且沒有細胞毒性和全身毒性。Shi等對複合微孔多聚糖止血粉的體外研究也表明該類型止血材料具有良好的可降解性以及安全性。Tschan等研究證實微孔多聚糖止血材料在神經外科手術中也是十分安全有效的。並且Singh等的研究表明微孔多聚糖的止血效果比普通明膠基質的止血效果好。因此,認為這些生物來源、無毒、親水性高、生物相容性和生物降解性良好的微孔多聚糖止血材料可以應用於臨床及術中快速止血。而本研究所用到的微孔多聚糖止血粉在體外生物降解後,主要成分是葡萄糖及麥芽糖等,這些成分均是人體所需的能量物質,不會對機體產生毒性,體外代謝結果表明使用微孔多聚糖止血粉1h之內即可被機體所代謝,這也為今後微孔多聚糖止血粉在臨床的使用提供了代謝依據。
聲明:本文所用圖片、文字來源《化工設計通訊》,版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題,請與本網聯係
相關鏈接:麥芽糖,三氟乙酸,α-澱粉酶,葡萄糖