3、固相高效線性關係考察
將分別精密量取的液相標準混合使用液0.1mL、0.5mL、色谱时测1.0mL、法同2.0mL、定糕点中的研2.5mL分別置5mL容量瓶中，种添加水稀釋至刻度，加剂究搖勻即得標準係列1～5，固相高效線性6直接取精密量對照品儲備溶液中的液相日落黃、新紅0.4mL，色谱时测糖精鈉、法同亮藍、定糕点中的研誘惑紅、种添靛藍、加剂究胭脂紅、固相高效山梨酸、納他黴素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度。項下的標準係列按上述色譜條件進行測試，以峰麵積為縱坐標，質量濃度為橫坐標繪製標準線性，得到線性回歸方程以及相關係數r，結果見表3。
結果表明，糕點中13種成分的線性關係良好，檢測限以S/N=3進行計算，結果滿足要求。
4、回收率與精密度
分別稱取9份陰性樣品，各2.5g，按上述色譜條件以及優化好的前處理方法，以低、中、高三個濃度水平進行添加標準混合儲備液為0.3mL、1.0mL、2.5mL，添加後濃度分別約為2.4μg/mL、8.0μg/mL、20μg/mL，按上述色譜條件以及優化好的前處理方法，稱取粉碎均勻的糕點樣品2.5g置50mL離心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亞鐵氰化鉀溶液和5mL219g/L乙酸鋅溶液，渦旋10min10min後取出，量取上清液5mL過QasisWAX固相萃取小柱（預先經3mL甲醇以及3mL水活化），棄去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL純化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脫並收集於15mL離心管中，在40℃水浴中氮吹至近幹後取出放置室溫，用5mL水複溶殘渣，過0.45μmGHP微孔濾膜後，待測。結果見表4，結果表明，糕點中13種食品添加劑平均回收率為82.1％～105.4％，RSD為小於5％（n=9），說明本次試驗方法回收率與精密度良好。
5、實際樣品測定
將8個批次樣品分別精密量取上述精密量取精密稱取新紅、胭脂紅、亮藍、赤蘚紅、靛藍、日落黃、誘惑紅38.25mg、12.45mg、12.77mg、25.53mg、11.17mg、34.80mg、10.76mg分別置50mL容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，得到7種人工合成色素濃度分別為：0.6801mg/mL、0.2236mg/mL、0.2339mg/mL、0.4391mg/mL、0.2011mg/mL、0.6299mg/mL、0.1857mg/mL；又分別精密稱取脫氫乙酸、苯甲酸、山梨酸、納他黴素、對照品27.88mg、18.19mg、11.45mg、10.00mg、11.78mg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到4種防腐劑濃度分別為：0.5520mg/mL、0.3636mg/mL、0.2267mg/mL、0.1980mg/mL；精密稱取糖精鈉對照品11.78mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到1種甜味劑濃度為：0.2356mg/mL；精密稱取富馬酸二甲酯對照品10.29mg置10mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，得到濃度為1.0280mg/mL。
對照品儲備溶液中的日落黃、新紅0.4mL，糖精鈉、亮藍、誘惑紅、靛藍、胭脂紅、山梨酸、納他黴素各取1.0mL，赤蘚紅0.7mL，脫氫乙酸0.5mL，苯甲酸取0.03mL，富馬酸二甲酯取0.25mL置同一25mL容量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度。標準混合使用液0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、2.5mL分別置5mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得標準係列1～5的標準混合使用液。結果8個批次中有5個批次檢出山甲酸、2個批次檢出苯甲酸，1個批次同時檢出新紅、山梨酸、靛藍、脫氫乙酸、胭脂紅，結果見圖3，檢出山梨酸的批次雖經光譜確認為陽性，但含量均在國家規定的範圍內（≤1.0g/kg），檢出苯甲酸的批次經光譜確認為陰性，同樣也符合國家標準規定（不得檢出），檢出新紅、山梨酸、靛藍、脫氫乙酸、胭脂紅的批次光譜確認圖見圖4，光譜確認圖中可見隻有山梨酸的樣品光譜圖與標準品的光譜圖一致，確認檢出山梨酸，含量為0.21g/kg，符合國家標準規定，針對檢出的樣品，本次試驗也采用國標進行驗證，結果與國標結果一致，說明本試驗方法可靠，值得推廣。
三、結論
本試驗建立了一種固相萃取一高效液相色譜法同時檢測糕點中13種食品添加劑的方法，本方法采用106g/L亞鐵氰化鉀和219g/L乙酸鋅作為蛋白沉澱劑去除樣品中存在幹擾的蛋白基質以及糖類等基質，經WatersOasisWAX固相萃取小柱進行富集、淨化，以Agilent5HC-C18（2）（4.6×250mm，5μm）色譜柱進行分離，0.02mol/L乙酸銨和甲醇為流動相，梯度洗脫，PDA檢測器進行定性定量檢測，采用對照品光譜圖對樣品中假陽性樣品進行確認，判定結果是否有檢出。通過試驗，本方法線性關係良好，回收率高，精密好，是一種能夠快速並同時檢測糕點中13種食品添加劑的方法本方法為食品添加劑的檢測提供一定的數據支持。
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