調查發現賀州市梔子種植基地部分梔子出現植株矮小,栀根葉片黃化失綠,结线生長緩慢,虫病嚴重的病定整株枯死等症狀。受害植株根部形成大小不一的栀根根結,根部表麵壞死呈疏鬆孔狀(圖1)。结线取根組織在體視顯微鏡下觀察可見大小不一的虫病卵囊,切開卵囊見橢圓形卵塊,病定根結組織內發現梨形的栀根雌蟲。采用改良貝曼漏鬥分離根際土壤可分離到大量根結線蟲二齡幼蟲。结线
雌蟲:蟲體乳白色,虫病梨形;頸部突出,病定與體分界明顯;陰門和肛門位於末端;會陰部為指狀花紋;側尾腺口點狀,栀根位於肛門兩側靠前位置;口針細長,结线椎體部向背麵略彎曲與杆部等長;口針基部球較小,虫病形成兩個球狀。中食道球卵圓形,瓣門近似圓形;排泄孔位於中食道球前口針基部稍後位置(圖2A)。會陰花紋近卵圓形或橢圓形;背弓較高,線紋較細且平滑,外側線紋呈波浪狀;具1~2條不太明顯側線;;腹麵線紋纖細光滑,尾部較明顯(圖2B)。
二齡幼蟲:線形,身體體環清晰明顯,頭架骨化弱,唇區縊縮不明顯;排泄孔位於半月體後;口針細長,基部較大且為圓球形;中食道球卵圓形;尾部透明區分界明顯,尾部縊縮明顯,尾尖鈍圓或細圓(圖3),其測量值見表1。
本研究中廣西賀州種群形態特征和測量值與象耳豆根結線蟲原始報道基本一致,故定為象耳豆根結線蟲。
利用通用引物F194/PXB481和D2A/D3B分別對二齡幼蟲核糖體ITS區域及28SrDNAD2D3區進行擴增,得到約700bp的片段,PCR產物擴增如圖(圖4)。經雙向測序和拚接獲得ITS片段大小為757bp,GenBank登錄號為MH756121、MH756122,與國內報道的福建、湖南、海南及越南象耳豆根結線蟲(M.enterolobii)群體的序列相似度是100%;與近似種南方根結線蟲(M.incognita)ITS(MH113856)的序列相似度為90%,與花生根結線蟲(M.arenaria)ITS序列(LC030356、LC030350)的序列相似度分別為88%和90%;與爪哇根結線蟲(M.javanica)ITS序列(AY438555、KX646187)的序列相似度均為88%。擴增的28SrDNAD2D3區片段大小分別為764bp和716bp,GenBank登錄號為MN648519和MN648520,其中MN648520與國內報道的廣東、福建,及美國、泰國象耳豆根結線蟲(M.enterolobii)群體的序列相似度為100%,MN648519與美國象耳豆根結線蟲(M.enterolobii)群體的序列相似度為100%,和中國福建、廣東及泰國象耳豆根結線蟲(M.enterolobii)群體的序列相似度為99%;MN648519與近似種花生根結線蟲(M.arenaria)和爪哇根結線蟲(M.javanica)D2D3區片段(AF435803、MT3412991)的序列相似度均為94%;MN648520與花生根結線蟲(M.arenaria)和爪哇根結線蟲(M.javanica)D2D3區片段(AF435803、MN096736)的序列相似度分別為95%和94%。該結果進一步表明該病原線蟲為象耳豆根結線蟲(M.enterolobii)。
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