稱取樣品(肝髒、改进腎髒、改进肌肉)2g(精確至0.01g)於50mL聚丙烯離心管中，改进加入混合同位素內標工作液100μL，改进冉加入2mL水，改进渦旋混合1min。改进加入0.2％鹽酸-乙腈溶液10mL，改进200r/min振蕩10min，改进加入2g氯化鈉，改进再振蕩10min，改进5000r/min離心5min。改进將全部上清液轉移至15mL聚丙烯離心管並40℃氮吹至約5mL，改进加入100mgPSA、改进80mgC18、改进30mgGCB，改进渦旋混合1min，振蕩10min，5000r/min離心10min。取全部上清液至另一個15mL聚丙烯離心管中，40℃氮吹至近幹，1mL甲醇定容，15000r/min離心5min，上清液供上機測定。
為減少實驗過程中帶來的汙染及背景幹擾，全程盡量避免使用聚四氟乙烯器皿而使用聚丙烯材質器皿。
本實驗采用標準工作溶液的配製：準確移取13種PFCs混合標準工作液、混合同位素內標工作液適量，用甲醇配製濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(同位素內標MPFOA濃度為1.5ng/mL、MPFOS濃度為3.0ng/mL)的係列標準工作溶液。MPFOA是定量9種PFCAs的同位素內標，MPFOS是定量4種PFSAs的同位素內標配製的係列標準工作溶液，按照標準工作溶液的配製：準確移取13種PFCs混合標準工作液、混合同位素內標工作液適量，用甲醇配製濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(同位素內標MPFOA濃度為1.5ng/mL、MPFOS濃度為3.0ng/mL)的係列標準工作溶液。MPFOA是定量9種PFCAs的同位素內標，MPFOS是定量4種PFSAs的同位素內標條件測定，繪製標準曲線。同時，選取9種空白樣品基質(豬肉、豬肝、豬腎、牛肉、牛肝、牛腎、羊肉、羊肝、羊腎)不加同位素內標按照稱取樣品(肝髒、腎髒、肌肉)2g(精確至0.01g)於50mL聚丙烯離心管中，加入混合同位素內標工作液100μL，冉加入2mL水，渦旋混合1min。加入0.2％鹽酸-乙腈溶液10mL，200r/min振蕩10min，加入2g氯化鈉，再振蕩10min，5000r/min離心5min。將全部上清液轉移至15mL聚丙烯離心管並40℃氮吹至約5mL，加入100mgPSA、80mgC18、30mgGCB，渦旋混合1min，振蕩10min，5000r/min離心10min。取全部上清液至另一個15mL聚丙烯離心管中，40℃氮吹至近幹，1mL甲醇定容，15000r/min離心5min，上清液供上機測定。
采用空白基質溶液作為溶劑配製相同濃度範圍的係列基質標準工作溶液，按照色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B繪製標準曲線。通過比較基質標準曲線與溶劑標準曲線方程斜率的比值來判斷基質效應的影響。
0.05、0.1、0.5、l、2、5、10ng/mL係列標準工作溶液按照色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應監測(MRM)；噴霧電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃；離子傳輸管溫度：270℃；鞘氣流速：30arb；輔助氣流速：10arb；二級碰撞氣：氬氣；碰撞氣壓力：1.5mTorr條件測定，同位素內標法定量，以各個目標物與對應的同位素內標物的峰斷積比值為縱坐標、以各目標物濃度與與對應的同位素內標物的濃度比值為橫坐標，求線性方程及相關係數。按照GB/T27417-2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》中5.4條款規定，在豬、牛、羊的肝髒、腎髒、肌肉空白樣品基質中添加預估最低可接受濃度0.15μg/kg，每個樣品平行測定10次，計算方法檢出限(LOD)=0+3SD、方法定量限(LOQ)=0+10SD。
按照GB/T27404-2008《實驗室質量控製規範食品理化檢驗要求》，對於未製定MRL限量的物質，回收率實驗應在方法測定低限、常見限量指標、一個合理的添加濃度三個水平進行。本實驗采用在豬肝、牛肝、羊肝、豬腎、牛腎、羊。腎、豬肉、牛肉、羊肉9個不同基質空白樣品中添加0.2、1和2μg/kg三個濃度，每個濃度6個平行，稱取樣品(肝髒、腎髒、肌肉)2g(精確至0.01g)於50mL聚丙烯離心管中，加入混合同位素內標工作液100μL，冉加入2mL水，渦旋混合1min。加入0.2％鹽酸-乙腈溶液10mL，200r/min振蕩10min，加入2g氯化鈉，再振蕩10min，5000r/min離心5min。將全部上清液轉移至15mL聚丙烯離心管並40℃氮吹至約5mL，加入100mgPSA、80mgC18、30mgGCB，渦旋混合1min，振蕩10min，5000r/min離心10min。取全部上清液至另一個15mL聚丙烯離心管中，40℃氮吹至近幹，1mL甲醇定容，15000r/min離心5min，上清液供上機測定。色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應監測(MRM)；噴霧電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃C；離子傳輸管溫度：270℃；鞘氣流速：30arb；輔助氣流速：10arb；二級碰撞氣：氬氣；碰撞氣壓力：1.5mTorr；同時做空白實驗，均扣除本底值後計算同收率及精密度。
采用美國ThermoFisherScientific公司Xcalibur3.0軟件、Origin8.0版本進行數據處理。
PFCs具有親水性和疏水性以及一定的表麵活性和極性，相關標準及文獻多數采川較低矽羥基活性填料的C18液相色譜柱分離、乙腈-乙酸銨水溶液或甲醇-乙酸銨水溶液流動相梯度洗脫，來實現這類化合物的良好分離。本實驗重點考察兩種流動相體係乙腈-乙酸銨水溶液、甲醇-乙酸銨水溶液對PFCs及同位素內標的靈敏度差異。通過比較相同濃度標液峰而積(見圖1)發現，兩種流動相梯度洗脫條件下，15種物質峰形均尖銳對稱。與乙腈-乙酸銨水溶液流動相相比，以甲醇-乙酸銨水溶液為流動相時，除PFBA峰麵積減少29％之外，其他14種物質的色潛峰峰麵積增加了22％～151％。所以，本實驗選擇峰而積較大、靈敏度較高的甲醇-乙酸銨水溶液作為流動相體係。
13種PFCs及2種同位素內標物是羧酸或磺酸鹽，在流動相中加入乙酸銨，能使溶液保持一定的pH及離子強度，可以有效地增強電噴霧離子化響應值，並減少溶劑效應，改善峰形。但也有研究表明，較高濃度的乙酸銨對質譜檢測有較強的抑製作用。標準及文獻中常見的乙酸銨濃度為1～10mmol/L，本實驗以甲醇和水為溶劑，分別配製相同濃度的乙酸銨甲醇溶液及乙酸銨水溶液。通過比較1、2.5、5、10mmol/L四個不同濃度條件下的測定結果(見圖2)可以看出，PFOS和PFDoA在1、2.5mmol/L濃度的峰麵積較高且幾乎相等，其餘13種物質均在乙酸銨濃度為2.5mmol/L時，色譜峰麵積達到最大值。
聲明：本文所用圖片、文字來源《食品工業科技》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係
相關鏈接：乙酸銨，乙腈，氯化鈉，鹽酸
