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抗新型冠状病毒候选药物法维拉韦首批国家对照品的研制(四)

来源:时间:2025-04-22 02:05:32

2.2.5 熾灼殘渣

按《中國藥典》2020年版四部通則0841熾灼殘渣檢查法,抗新取待標品約1 g,型冠选药精密稱定,状病照品制置鉑坩堝中於700 ℃下熾灼至恒重,毒候的研計算殘渣量為0。物法维拉韦首

2.3 含量測定

2.3.1 質量平衡法

根據水分、批国殘留溶劑、家对熾灼殘渣及HPLC純度的抗新測定結果,按質量平衡法計算,型冠选药本批對照品的状病照品制含量=(1-水分-殘留溶劑-熾灼殘渣)×HPLC純度=(1-0.15%-0.12%-0)×100%=99.73%,修約為99.7%。毒候的研

2.3.2 氟核磁共振定量法

采用氟核磁共振定量法對質量平衡法賦值結果進行驗證,物法维拉韦首采用zgig脈衝序列在恒溫25 ℃下獲取19F核磁共振譜,批国見圖8,家对譜寬δ 60,抗新射頻中心頻率δ -100,采樣點數131 072,采樣時間1.91 s,弛豫時間30 s,采樣次數16,空掃次數4,增益101。分別精密稱取法維拉韋約20 mg與內標物質4,4’-二氟二苯甲酮約10 mg,置同一離心管中,加2 mL氘代二甲基亞碸溶解,取約0.7 mL溶液轉入5 mm核磁管中測定。平行配製3份樣品溶液,采用δ -92.8處樣品信號和δ -106.5處內標響應信號,以核磁共振定量法計算法維拉韋含量為99.0%(n=3,相對標準偏差(RSD)= 0.92%)。

2.3.3 進口對照品外標法

采用HPLC法測定,色譜柱為ACE Excel C18-AR(4.6 mm×150 mm,3 µm),柱溫40℃,流動相為磷酸二氫鉀緩衝液(pH 2.5)-乙腈(93:7),流速1.0 mL/min,檢測波長322 nm。待標品和對照品溶液的質量濃度均為0.2 mg/mL,按外標法計算,以法維拉韋TLC進口對照品作為對照,本批對照品含量為100.7%。

2.3.4 差示掃描量熱法

稱取法維拉韋待標品約3 mg,置40 μL標準鋁坩堝中測定分析。溫度範圍175~205 ℃,升溫速率為0.5 ℃/min,氣氛氮氣體積流量為50 mL/min。結果見圖9,待標品的起始熔點為189.0 ℃,DSC純度為99.8%,測試結束後待標品粉末變黑,可能熔融分解,該項純度結果僅供參考。

2.4 均勻性和穩定性考察

2.4.1 均勻性考察

法維拉韋待標品分裝後,隨機抽取12支,每支獨立測定2次,稱樣量為20 mg,質量濃度為0.2 mg/mL。按“2.3.3”項色譜條件采用HPLC法測定,按照隨機序列表進樣,以峰麵積/稱樣量為Y軸,瓶號為X軸,進行單因子方差分析,P=0.27>0.05,結果表明該批待標品瓶間瓶內均勻性良好。

2.4.2 穩定性考察

將分裝後的法維拉韋待標品置於40 ℃、RH 75%恒溫恒濕箱中,考察本品在極端運輸條件下10 d內的穩定性,依次在第0、5、10天分別取樣2瓶,監測HPLC純度變化情況。第0、5、10天的測定結果均未檢出雜質,HPLC純度為100%,法維拉韋主峰響應值一致,表明該批待標品在極端運輸條件下10 d內穩定性良好,可以常溫條件運輸。

3 討論

法維拉韋首批國家對照品研製中,采用了質量平衡法、氟核磁共振定量法、進口對照品外標法以及差示掃描量熱法4種不同原理的含量測定方法測定了對照品的含量,結果分別為99.7%、99.0%、100.7%、99.8%。由於質量平衡法是WHO推薦的藥品標準物質定值方法,能夠更準確地反映本品的真實含量,因此該批對照品以質量平衡法的結果進行賦值。研製得到的法維拉韋首批國家對照品具備純度高、量值準確、穩定性好的特性。

氟核磁共振譜圖一般較寬,發生樣品響應信號與內標信號重疊或幹擾的可能性較小,內標選擇比氫核磁共振定量試驗的限製更少。但較寬的圖譜容易導致基線不平,相位較差。為了消除這些影響,本試驗將射頻中心頻率設定為δ -100.0,位於樣品信號(δ -92.8)與內標信號(δ -106.5)的中間,同時譜寬設置為δ 60,可以完整覆蓋樣品與內標的信號範圍,所得譜圖基線平整,適合進一步的核磁定量積分。

法維拉韋作為首個在此次疫情期間批準上市的抗病毒藥物,引起了各界高度關注,關於其治療COVID-19的臨床試驗已在全國多家中心啟動。根據現有研究結果,法維拉韋對COVID-19有一定抗病毒療效,將其臨床適應證擴展至COVID-19值得期待,有待更大規模的臨床試驗驗證。

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