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肠道集聚性大肠埃希氏菌菌体和gDNA标准物质的研制 (四)

来源:时间:2025-04-21 21:38:08

2.5標準物質的肠道肠埃穩定性檢測結果

2.5.1運輸穩定性結果

將所製備的EAEC菌體標準物質分別存放於25℃和37℃條件下,於1、集聚菌菌3、性大希氏5、体和7天各抽取3個樣品,标准通過螺旋塗布進行菌落計數。物质計數結果如表5所示,肠道肠埃EAEC菌體標準物質在25°C條件下保存7天穩定性良好,集聚菌菌在37℃環境下5天內穩定情況良好,性大希氏第7天活菌數量下降出現不穩定現象,体和但菌含量仍能維持在103CFU/樣品水平條件,标准即滿足定性樣品的物质要求。

對分別在25℃和37℃條件下存放14天的肠道肠埃3個EAECgDNA標準物質樣品進行特征性基因檢測,PCR產物電泳結果如圖3所示,集聚菌菌astA、性大希氏aggR、pic基因均能擴增出清晰的條帶。說明EAECgDNA標準物質在25°C和37℃條件下保存14天穩定性良好。

上述數據表明,EAEC菌體標準物質和gDNA標準物質在非高溫季節,可以常溫運輸,而在高溫季節可以采用泡沫箱加冰袋的方式進行低溫運輸。

2.5.2儲藏穩定性結果

將製備的EAEC菌體標準物質於-20℃和4℃保存。選擇4℃保存7、14和28天,-20℃保存28和60天,分別對EAEC菌含量進行檢驗。通過與0天時的數據比較計算複蘇率,從而評價儲藏穩定性。由表6數據可以看出,-20℃保存60天複蘇率為100%,表明-20℃作為標準物質的儲藏條件可以滿足穩定性要求。4℃條件下,保存14天複蘇率為95.6%,28天複蘇率為78.2%,樣品中菌含量仍保持在103CFU/樣品水平,樣品仍然穩定,說明4℃可以作為短期儲存條件。

對分別在-20℃和4℃條件下存放60天的3個EAECgDNA標準物質樣品進行特征性基因檢測,PCR產物電泳結果如圖4所示,EAECgDNA標準物質在-20°C和4℃條件下保存60天均能對astA、aggR、pic基因擴增出特異性條帶。說明-20℃和4℃滿足gDNA標準物質的儲藏條件。

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