燕窩為雨燕科金絲燕屬鳥類分泌的燕窝验唾液與其羽絨混合凝結而成的物質，營養價值豐富，消化具有多種生物活性。特性燕窩主要營養成分為蛋白質、外实碳水化合物、燕窝验唾液酸，消化同時含有微量的特性脂質和無機元素。唾液酸是外实燕窩的核心物質，是燕窝验腦神經節苷脂的有益成分。燕窩的消化生物活性和其消化特性有關。研究發現，特性燕窩經過消化後抗氧化活性顯著提高，外实能夠保護細胞免受氧化損傷。燕窝验Ghassem等發現燕窩模擬消化產物中的消化多肽組分具有較高的抗氧化能力，分離純化發現其中PFHPY和LLGDP兩種肽能夠保護HepG2細胞免受H202誘導的特性氧化損傷。Wong等研究發現，消化後的燕窩具有更強的美白活性和成骨活性，能夠抑製酪氨酸酶的活性，減少小鼠黑色素瘤細胞巾的黑色素分泌量，同時促進成骨細胞增殖，增加小鼠的骨強度和真皮厚度。
唾液酸對酪氨酸酶活性具有劑量依賴性的抑製作用，對皮膚有美白功效。多肽和唾液酸是消化產物中的主要功能活性成分。目前關於燕窩的研究主要集中在原料的品質偽劣鑒定和生物活性評價，關於燕窩消化特性的研究沒有詳盡的報道。作者采用Standard法模擬燉煮燕窩體外胃腸的消化，對燕窩蛋白和碳水化合物的含量和組成進行了全麵的測定分析，為進一步開發高胃腸消化特性的燕窩新產品提供理論指導。
燕窩：市售；胃蛋白酶、胰蛋白酶：Sigma公司產品：鼠李糖，半乳糖，甘露糖，鄰苯二胺鹽酸鹽，國藥化學試劑有限公司產品：氨基葡萄糖、D-半乳糖胺鹽酸鹽、N-乙酰葡萄糖胺、N-乙酰半乳糖胺、唾液酸：上海創賽有限公司產品；其他試劑均為分析純。
傅立葉紅外光譜儀：美國賽默飛世爾科技公司：PowerPacTMBasicPowerSupply基礎電泳儀電源：伯樂生命醫學產品上海有限公司產品：搖擺式高速萬能粉碎機：溫嶺市林大機械有限公司產品：DL-5-A低速台式大容量離心機、KDN-08C數顯溫控消化爐：上海新嘉電子有限公司產品：UV-2802紫外可見分光光度計：尤尼柯(上海)儀器有限公司產品：KDN-103F凱氏定氮儀：上海纖檢儀器有限公司產品：高效液相色譜儀Waters2695(Waters2475熒光檢測器、Waters2998紫外檢測器)：美國Waters公司產品。
燕窩研磨成粉末，用60目篩子過濾，收集過濾粉末，裝袋，-20℃貯藏。
利用Standard法模擬胃腸消化：稱量0.8g燕窩粉末，溶於10mL水中，沸水水浴1h，冷卻至室溫。將燕窩溶液與10mL的模擬胃液混合於50mL離心管內，37℃恒溫振蕩水浴，HCl調節pH使其始終保持在2.0±0.2，在100r/min的速度下模擬胃階段消化，每個時間點單獨做一個消化管，每隔30min依次用堿液調節pH至8.0滅酶，以4500g離心分離上清液，-20℃貯藏，分析0，30，60，90，120min的消化情況。胃消化結束後，進入小腸消化階段。加入16mL模擬腸液，NaOH調節pH使其始終保持在7.0±0.2，補水使體係達到40mL。繼續在100r/min的攪拌速度、37℃的溫度下進行腸階段體外消化，每個時間點單獨做一個消化管，每隔30min將一個離心管進行沸水浴滅酶，4500g離心分離，上清液-20℃貯藏，離心沉澱物進行凍幹儲藏，分析150，180，210，240min的消化情況。
蛋白質含量測定：參照國標GB5009.52016凱氏定氮法，蛋白質折算係數6.25，分別測定燕窩原料蛋白質含量和消化上清液中的水溶性蛋白質含量：總糖含量測定：參照國標GB/T15672—2009苯酚硫酸法，葡萄糖為標準品，分別測定燕窩原料總糖含量和消化上清液中的總糖含量。
參考楊文博等人的方法，采用甲醛滴定法。
水溶性蛋白質水解度(％)=p×V/m(1)
式中：P為消化上清液中遊離氨基酸態氮質量濃度，g/mL：V為消化液體積，mL；m為消化上清液巾的燕窩蛋白總氮質量，g。
參考GB31645—2018膠原蛋白肽的測定。色譜條件：TSKgelG2000SWXL300min×7.8mm：柱溫：30℃：流動相：乙腈：水：三氟乙酸，體積比為40:60:0.05。檢測器：紫外檢測器220nm；流量：0.5mL/min；進樣體積10μL。
采用NicoletiS50FTIR型傅立葉變換紅外光譜儀測定。掃描次數32次，入射角45°，掃描波數範圍4000～600cm-1，分辨率為4cm-1。測試樣品粉末衰減全反射紅外光譜(ATR-FTIR)，每個樣品重複采集3次。
參考袁玲和張肩偉等人的方法，采用領苯二胺(OPD)柱前衍生法測定燕窩原料和消化上清液的唾液酸含量。
取50mg原料溶解在40mL的體積分數1％磷酸溶液中，沸水浴水解20min，冷卻後加入20mg/mL的鄰苯二氨鹽酸鹽溶液1mL，80℃避光水浴40min，水係濾膜過濾，準備進樣。
遊離態唾液酸測定,取1mL液體樣品，加入20mg/mL的鄰苯二氨鹽酸鹽溶液1mL,50℃避光水浴2.5h，改變溫度至4℃繼續衍生48h，水係濾膜過濾，準備進樣。
聚糖態唾液酸測定，取1mL液體樣品，按體積比1:1加入Sevage試劑(V(三氯甲烷)：V(正丁醇)=4:1)反複萃取除去蛋白質，加入20mg/mL的鄰苯二氨鹽酸鹽溶液1mL，80℃避光水浴40min，水係濾膜過濾，準備進樣。
蛋白態唾液酸測定，取1mL消化上清液酸解，測定清液中唾液酸總量。
未溶解唾液酸測測定，取50mg燕窩消化後的離心沉澱物，溶解在40mL的1％體積分數磷酸溶液中，沸水浴水解20min，80℃避光水浴40min，水係濾膜過濾，準備進樣。
參考戴軍等人方法，采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色譜法測定燕窩原料和消化上清液的單糖組成。
取消化液與上樣緩衝液等體積均勻混合，100℃加熱3min變性處理，8000r/min離心3min。還原電泳條件：10g/dL分離膠，5g/dL濃縮膠，上樣量10μL。對燕窩糖蛋白中的蛋白和糖鏈分別進行單獨染色，考馬斯亮藍R-250進行蛋白染色，高碘酸-席夫堿法進行糖染色。ImageLab圖像軟件用於SDS-PAGE凝膠分析。
所有數據均進行3次重複測定，采用SPSSl9.0和Origin8.0進行處理和統計分析。
相關鏈接：鼠李糖，三氟乙酸，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮，鄰苯二胺鹽酸鹽
聲明：本文所用圖片、文字來源《食品與 生物技術學報》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係
