1.3.3 茶多酚標準溶液配置

分別稱取對照品沒食子酸、高效沒食子酸兒茶素沒食子酸酯、液相叶中表兒茶素、色谱时测表沒食子酸兒茶素、法同表兒茶素沒食子酸酯、定茶多酚表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯標準品0.1g，种茶精密稱定後分別置於100mL容量瓶中，含量甲醇溶液稀釋至刻度，高效搖勻後即得對照品溶液1.00mg/mL，液相叶中置於-20℃冰箱中，色谱时测備用。法同

1.3.4 色譜條件選擇

AgilentC18色譜柱（250mm×4.6mm，定茶多酚5.0μm），种茶流動相：A：0.3%甲酸水溶液；B：0.3%甲酸甲醇溶液；柱溫：40℃；流速：1mL/min；檢測波長：280nm；進樣量：10μL；梯度程序：0min（85%A+15%B），含量60min（70%A+30%B），高效DAD檢測器。

1.3.5 方法學測定

1.3.5.1 線性

分別取沒食子酸、沒食子酸兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素、表沒食子酸兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯儲備液，配製成2.00、4.00、8.00、20.00、40.00、100.00μg/mL的係列標準工作液，高效液相色譜儀進樣測定相應的峰麵積，以峰麵積為縱坐標，以濃度為橫坐標繪製標準曲線，計算回歸方程和相關係數。

1.3.5.2 檢測限和定量限

分別測定6種茶多酚檢測限和定量限，檢測限S/N為3，定量限為3倍檢測限。

1.3.5.3 精密度

分別配製沒食子酸、沒食子酸兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素、表沒食子酸兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯標準品溶液，按實驗條件，平行測定6次。

1.3.5.4 加樣回收率

分別取6種茶多酚標準溶液加入1mg標準品，進行加樣回收率計算。

1.3.6 供試品製備

供試品茶粉0.5g，根據最優提取方法分別製備熱水浸提溶液和醇提取液各5mL，樣品采用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液為供試品溶液，置-20℃冰箱中保存備用。

2 結果與分析

2.1 單因素實驗

茶葉中總酚含量隨時間、溫度、固液比和乙醇濃度變化見表2。根據單因素實驗確定響應麵法優化熱水浸提條件提取時間10～50min，溫度60～100℃，固液比為4～8（mL/g），乙醇提取條件為時間20～60min，乙醇濃度0%～100%，固液比為4～9（mL/g）。

2.2 響應麵法優化提取工藝

2.1.1 熱水提取工藝

根據響應麵法優化，確定提取溫度為80℃，固液比為6∶1（mL/g）；提取時間為29min，過濾取濾液，最優條件多酚含量為13.47mg/mL。

2.1.2 超聲醇提取工藝

準確稱取0.5g茶葉粉碎過60目篩的恒重茶粉末，根據響應麵法優化，確定溶劑乙醇濃度50%，固液比6.5∶1（mL/g），提取時間40min，過濾取濾液，最優條件多酚含量為11.30mg/mL。

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