②氦氣鼓泡脫氣法:向流動相中吹入氦氣,高效把溶解在流動相中的液相空氣攜帶出。該方法每年大約要消耗掉一瓶高純氦氣,色谱成本偏高,高效但脫氣效果好,液相可用於低壓梯度洗脫。色谱在0.5MPa的高效壓力下,先以100mL/min,液相鼓泡15min,色谱然後以20~30mL/min維持。高效
③高效液相色譜儀配備流動相在線脫氣裝置:它屬於合成樹脂膜過濾器。液相溶解在流動相中的色谱氣體可以從膜中被真空脫出,而液體不會從膜中出來。高效脫氣效果最好。液相
(3)高壓輸液泵:由於高效液相色譜柱中填料顆粒較細,色谱通常為5~10μm,而且致密。這樣通過色譜柱的流動相會受到很大的阻力,為縮短分析時間,必須使用高壓泵,向色譜柱提供流量穩定、重現性好的流動相。對高壓輸液泵的要求,一是流量穩定,輸出的流動相脈衝小,流量精度和重複性優於0.3%;二是流量範圍寬,分析型為0.1~10mL/min範圍內連續可調且容易調節,適應微柱的高壓泵最小體積流量為0.01mL/min,製備型色譜儀所用高壓輸液泵最大流速可達100mL/min;三是輸出壓力高,密封性能好,最高輸出壓力可達40~50MPa;四是泵液缸體積小,方便更換流動相,減少係統平衡時問;五是耐腐蝕性好,多用不鏽鋼、聚四氟乙烯材料製造,也有用精密陶瓷的,泵的活塞多采用石英杆,單向閥通常是人造紅寶石或藍寶石;六是具有等度和梯度洗脫功能,噪聲低且具有安全過壓保護裝置;七是易於維護和維修。
商品高壓輸液泵有恒流、恒壓兩種類型。恒流泵使輸出的液體流量穩定,而恒壓泵使輸出的液體壓力穩定。恒流泵有往複式柱塞泵和注射泵,恒壓泵有氣動放大泵。在色譜實際分析操作中,色譜柱係統的阻力由於某些原因可能有所變化,因此恒流泵比恒壓泵更優越,組分的保留時間相對穩定。在目前高效液相色譜儀上采用最多的是並聯雙泵頭往複式柱塞泵。工作時電動機帶動偏心輪轉動,偏心輪驅動活塞在液缸內往複運動。柱塞向後運動時,液缸內形成真空,這時溶液出口單向閥關閉,流動相在大氣壓力或正壓下自溶劑進口單向閥進入液缸。柱塞向前運動時,單向閥動作反向,達到一定壓力時,流動相自溶劑出El單向閥壓出到色譜柱。如此循環往複,使流動相連續進入色譜柱。當柱塞往複運動加快時,提供的流速加大,反之就小。因為在泵處於吸液衝程時沒有輸出,流動相流量的脈動將使儀器無法正常工作,所以多采用雙柱塞和加脈動阻尼器來減少脈動。增加柱塞,脈動減小,流量更平穩,但泵成本高,故障率也高。若想讓柱塞泵正常工作,一個很重要的條件就是液缸內不能進入氣泡或進入後及時排出。柱塞密封墊(亦稱泵封)是易損件,當泵漏液時必須更換。
壓力表示單位比較多,我國目前法定采用的標準壓力單位為Pa。
(4)梯度洗脫裝置:在分析過程中,兩種或以上的溶劑作為流動相的比例不發生變化的洗脫模式稱為等度洗脫。等度洗脫的優點是色譜柱始終處於平衡狀態,分析周期短,能連續進樣,組分保留時間重現性好;其不足是可能存在有些組分短時間內無法洗脫出來,因此需要定期用100%乙腈或甲醇將色譜柱徹底衝洗幹淨。所謂梯度洗脫,就是將兩種或兩種以上不同極性的溶劑進行混合,作為流動相使用。進樣後,連續不斷地按擬定的程序改變流動相的配比,使洗脫能力逐漸變化。由於流動相極性發生變化,使得選擇性得以改善,因而提高了分辨能力,縮短了分離時間。常用的梯度洗脫方式有低壓梯度洗脫和高壓梯度洗脫。高壓梯度裝置是用高壓泵分別將兩種或三種不同極性的溶劑輸入混合器,充分混合後進入色譜柱。
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