依據可測性原則，查閱中國藥典明確規定九味藥材中6個定量成分的基于结合胶囊測定方法和限度要求，分別為羥基紅花黃色素A（指標含量≥1.0%）、蛛网中的质量原兒茶酸（指標含量≥0.02%）、模型刺五加苷B（指標含量≥0.04%）、辨析标志4-甲氧基水楊醛（指標含量≥0.20%）、舒筋絡石苷（指標含量≥0.45%）以及山奈素。活血α-香附酮、五原则豆甾醇、基于结合胶囊β-穀甾醇、蛛网中的质量木酚素、模型β-胡蘿卜素和除蟲菊素已有文獻報道其含量測定的辨析标志方法。丁香脂素、舒筋高聖草素-7-O-β-D-芹菜糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、活血杠柳苷A、五原则去甲絡石苷和玉柏堿無文獻明確報道其含量測定的方法。
Q-marker的核心要素是“有效”，因為對中藥有效性的控製是質量控製的根本目的，基於網絡藥理學從“中藥-成分-靶標-通路”網絡圖中發現與疾病相關的中藥化學成分作為候選的質量標誌物，是有效性的藥效研究的關鍵思路。在臨床上已經證明舒筋活血膠囊治療骨質疏鬆症具有較好的臨床療效，因此，我們選擇以骨質疏鬆症為疾病模型。
基於網絡藥理學的研究方法，探究舒筋活血膠囊治療骨質疏鬆症發揮藥效的化學成分及其作用的基因靶點與信號通路。在TCMSP數據庫中逐一輸入舒筋活血膠囊各單味藥材名稱，收集各味藥材目前收錄於該數據庫的所有化學成分，根據其ADME（吸收、分布、代謝、排泄）OB≥30%，DL≥0.18，CACO-2≥0.4，BBB≥-0.3對化學成分的類藥性進行評分，選出其中的活性成分。舒筋活血膠囊中總共篩選出16個活性化合物，見表2，其中紅花8個活性化合物、香加皮3個活性化合物、絡石藤3個活性化合物、伸筋草3個活性化合物、雞血藤6個活性化合物、澤蘭2個活性化合物、香附3個活性化合物，槲寄生3個活性化合物，狗脊中並無活性成分。
判斷中藥複方有效性的指標是靶點的有無及作用的強弱，將收集的所有活性化合物輸入到Genecards數據庫，收集所有活性成分和疾病“Osteoporosis”靶點，篩選出每個化合物與疾病“Osteoporosis”的相同靶點。故在Uniprot數據庫中，輸入整理的相同靶點基因名稱進行檢索，得到基因的ID。將上述獲得的基因的ID輸入到DAVID數據庫，進行KEGG通路富集分析，富集分析後將所得的結果設置成FDR＜0.05、P＜0.01作為顯著性強的標準進行篩選，篩選出重要的信號通路並分析。
將上述活性成分、基因靶點、信號通路相互作用的數據整理成表格。整理藥材和活性成分、活性成分與靶點、靶點與信號通路之間的相互關係。將上述數據聯係導入Cytoscape軟件中，得到“藥材-化合物成分-基因靶點-信號通路”之間相互作用和關聯的網絡圖（見圖3）。
收集各化合物和疾病Osteoporosis的基因靶點，其中疾病Osteoporosis的靶點基因4078個，化合物與疾病相同基因靶點有184個。得到的相同的基因靶點ID輸入到DAVID數據庫中，舒筋活血膠囊中所有化合物涉及的184個靶點基因分析了83.9%通路，所作用的信號通路信息共135條，以FDR＜0.05、P＜0.01篩選出78條通路，選擇前23條信號通路分析，其具體信息如表格3所示，舒筋活血膠囊裏的有效成分通過這些通路來實現治療骨質疏鬆症的目的。
如圖3所示，從上至下依次為舒筋活血膠囊的單味藥材、藥材中發揮作用的活性成分、活性成分所作用的基因靶點、基因靶點所涉及的信號通路。該圖直觀的呈現出舒筋活血膠囊中“藥材-化合物成分-基因靶點-靶點通路”之間的關係。
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