牛舌草為紫草科植物意大利牛舌草AnchusaitalicaRetiz．或琉璃苣BoragoofficinalisL．的面法地上部分，是优化艺及A氧我國新疆地區常用藥材，牛舌草藥材收載於《中華人民共和國衛生部藥品標準》維藥分冊，牛舌用於治療心悸，草多失眠，糖提神誌不安，取工其对頭痛，化损反應遲鈍，保护是作用愛維心口服液等製劑中的主藥，同時，面法琉璃苣(BoragoofficinalisL．)也是优化艺及A氧一種可以食用的植物，其新鮮植物體可以作為蔬菜煮食，牛舌也可作為芳香調味料使用。草多研究表明，糖提牛舌草提取物具有抗氧化、取工其对抗癌、防治哮喘和阿爾茨海默病的作用，經預試驗發現牛舌草含有豐富的多糖類成分，但目前未見深入研究報道。植物多糖具有多種生物活性，包括抗癌、降血糖等。本文著眼於對牛舌草多糖類成分的提取和含量測定，並研究了牛舌草多糖體外抗DNA氧化損傷作用，為將來進一步研究牛舌草的化學成分和藥理活性奠定基礎工作。
一、材料與方法
1、材料與試劑
牛舌草購自新疆維吾爾自治區維吾爾醫院，由新疆醫科大學藥學院帕麗達教授鑒定為紫草科植物琉璃苣BoragoofficinalisL。
葡萄糖對照品(SigmaG8270，純度＞98％)；鯡魚精DNA(北京索萊寶科技有限公司，生物試劑，純度99.5％)；蒽酮(國藥集團化學試劑有限公司，分析純)，硫酸(天津市永晟精細化工有限公司，分析純)；乙醇(天津市天新精細化工開發中心，分析純)；蒸餾水(實驗室自製，18.2MΩ·cm-1)。
2、主要儀器設備
T6新世紀紫外可見光分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；KQ-700DV型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-S4數顯水浴鍋(金壇醫療儀器廠)；ABl04—N型電子天平(Meller—ToledoInsterLTD)。
3、方法
（1）牛舌草多糖的製備
取牛舌草粉末經3倍量石油醚回流3次，每次3h，藥渣揮幹後用3倍量的95％乙醇回流3次，每次3h，藥渣揮幹後取0.5g加蒸餾水20mL超聲提取3次，每次30min，提取液過濾合並後濃縮至10mL，Sevag法(氯仿：正丁醇5∶1)除去蛋白質，加無水乙醇至80％進行沉澱，離心後得到的多糖沉澱用無水乙醇、丙酮，乙醚反複洗滌後幹燥，得精製多糖。
（2）葡萄糖標準儲備液的配製
精密稱取葡萄糖對照品50.05mg在50mL容量瓶中用蒸餾水溶解，隨後定容至刻度，得葡萄糖對照品溶液，其濃度為1.001mg/mL的。
（3）標準曲線的製備
精密吸取葡萄糖標準儲備液2、3、4、5、6mL分別置於25mL容量瓶中用蒸餾水定容，各取1mL係列葡萄糖標準溶液至具塞試管中，以1mL蒸餾水作空白，硫酸蒽酮一硫酸法顯色，並在620nm處測定吸光度值，以葡萄糖對照品得濃度(mg/mL)對其吸光度A進行回歸後得到標準曲線，回歸方程為A=28.55C+0.0062，R2=O.9995，線性範圍：0.01600—0.04800mg/mL。
（4）樣品溶液的配製
將牛舌草藥材粉末經3倍量的石油醚和3倍量的95％乙醇分別回流3次，每次3h，脫色並除去單糖和寡糖，揮幹溶劑並幹燥後精密稱取藥材粉末0.5g置錐形瓶中，加入蒸餾水20mL，超聲提取30min，提取1次，離心得牛舌草多糖樣品溶液。
（5）換算因子的測定
精密稱取兩份精製牛舌草多糖，各10mg，在50mL容量瓶中用蒸餾水溶解後定容至刻度，精密吸取該溶液0.5mL，將牛舌草藥材粉末經3倍量的石油醚和3倍量的95％乙醇分別回流3次，每次3h，脫色並除去單糖和寡糖，揮幹溶劑並幹燥後精密稱取藥材粉末0.5g置錐形瓶中，加入蒸餾水20mL，超聲提取30min，提取1次，離心得牛舌草多糖樣品溶液。每份溶液測定3次並按下麵的公式計算換算因子：
f=w/(C×D)，
式中：w為多糖質量，以mg計；C為多糖溶液中葡萄糖濃度，以mg/mL計；D為多糖稀釋因素，取兩者平均值，測得f=1.03。
(6)多糖含量的測定
精密吸取樣品溶液1mL置於10mL容量瓶中並用蒸餾水定容，混勻，取該溶液0.5mL在具塞試管中顯色，在620nm處測定吸光度。多糖含量=(c×D×f)/w×100％。其中w為多糖樣品的質量，以g計；f為換算因子；C為多糖溶液中葡萄糖濃度，以mg/mL計；D為多糖稀釋因素。
(7)精密度實驗
精密吸取葡萄糖標準溶液4mL在25mL容量瓶中稀釋定容，並取該溶液1mL在具塞試管中顯色，重複測定6次，RSD為0.23％，表明儀器精密度良好。
(8)穩定性實驗
按樣品溶液製備方法製備一批樣品，分別測定0、1、2、3、4、5、6h的吸光度，計算多糖含量，RSD為2.33％，表明樣品溶液6h內穩定。
(9)重複性試驗
根據精密吸取葡萄糖標準儲備液2、3、4、5、6mL分別置於25mL容量瓶中用蒸餾水定容，各取1mL係列葡萄糖標準溶液至具塞試管中，以1mL蒸餾水作空白，硫酸蒽酮一硫酸法顯色，並在620nm處測定吸光度值，以葡萄糖對照品得濃度(mg/mL)對其吸光度A進行回歸後得到標準曲線，回歸方程為A=28.55C+0.0062，R2=O.9995，線性範圍：0.01600—0.04800mg/mL。項下的方法製備10份樣品溶液，測定各溶液中的多糖含量，其RSD為2.11％，表明方法精密度良好。
(10)加樣回收率試驗
(11)響應麵法優化實驗設計
選取料液比，提取時間，超聲功率，提取次數四個因素，在單因素實驗的基礎上利用Design—Expert8.0.6軟件設計四因素三水平實驗，各因素和水平如表2中所示，響應麵設計和實驗結果如表3中所示。
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相關鏈接：鯡魚精，蒽酮，葡萄糖，硫酸
