胭脂蟲紅色素是高效近年來逐步受到廣泛應用的天然色素，是液相胭脂從寄生在仙人掌上的胭脂蟲雌蟲體內提取出的一種天然蒽醌類色素，主要成分是色谱胭脂紅酸。20世紀90年代，法测我國首次從國外引進胭脂蟲，定多的含並人工繁養成功，类食量2002年在雲南省有規劃種植胭脂蟲。品中胭脂蟲紅因其穩定、虫红安全等特點，高效已成為優質的液相胭脂食用色素，它是色谱一種美國食品和藥品監督管理局（FDA）允許既可用於食品，又可用於藥品和化妝品的法测天然色素。
國家標準GB2760-2014中對胭脂蟲紅在不同種類食品中的定多的含使用限量進行了要求。國外一般采用美國化學品法典（FCC）的类食量標準法測定胭脂蟲以及其相關產品中的胭脂蟲紅的含量，我國食品添加劑委員會則采用吸光度來表示胭脂蟲紅的品中含量，但是以上兩種方法不能應用於食品中胭脂蟲紅含量的測定。近年來食品中胭脂蟲紅的相關檢測方法的研究不斷出現，如反相薄層色譜（TLC）/光密度掃描分析法、高效毛細管電泳法、液相色譜法和超高效液相色譜—質譜聯用法，但是以上研究所涉及的食品種類較少。本文針對不同類型食品，包括糕點、餅幹、糖果、巧克力、熟肉製品等五種，研究了胭脂蟲紅提取的前處理方法，建立了高效液相色譜法測定食品中的胭脂蟲紅的含量，可為以後食品中胭脂蟲紅的監督檢測提供有效的參考方法。
一、實驗部分
1、樣品采集
采集了5種不同類型的樣品，包裝規格分為盒裝、袋裝及散裝，分別為雙莓味紅絲絨蛋糕、香腸（原味）、棒棒糖、草莓味夾心餅幹、巧克力豆。以上樣品依次編號為1～5#。
2、儀器與試劑
Agilenttechnologies1260型高效液相色譜儀（美國Agilent）；分析天平（德國Sartorius）；台式冷凍離心機3K15（德國SIGMA）；恒溫水浴鍋DKZ-2B（上海精宏）；旋渦混勻器基本型-MS3basic（德國IKA）；聚酰胺固相萃取小柱（60mg/3mL）。
胭脂紅酸（CAS1260-17-9，純度91.7%，德國Dr.EhrenstorferGmbH）；乙腈；0.01%、0.05%、0.1%甲酸水溶液；0.1%磷酸水溶液；2mol/L鹽酸溶液；酸化甲醇（甲酸∶甲醇=1∶50；v∶v）；氨水甲醇（體積分數為5%的氨水∶甲醇=1∶1；v∶v）；超純水。
3、實驗條件
（1）標準溶液的配製
準確稱取胭脂蟲紅酸標準品0.1090g（精確稱量至0.0001g）於100mL容量瓶中，用超純水溶解、定容，配製成質量濃度為1000mg/L的儲備液（於4℃下保存，保存期3個月）。以胭脂紅酸標準溶液為母液，以超純水為稀釋液配製成質量濃度分別為2.50、5.00、10.0、20.0、40.0、100mg/L係列標準溶液，現配現用。
（2）樣品前處理
①樣品的製備：將樣品用粉碎機充分粉碎，後裝入潔淨的可密封盛樣容器中，密封並標明標記，於0℃～4℃冷藏保存。
②樣品的提取與淨化：稱取粉碎均勻的樣品2g置於50mL離心管中，加入2mol/L鹽酸溶液10mL，旋緊蓋子，置於80℃水浴中30min，取出冷卻，之後再加入甲醇15mL，振搖混勻，待淨化。
（3）色譜條件
（a）色譜柱：Agilent5TC-C185μm×4.6mm×150mm；
（b）柱溫：35℃；
（c）進樣量：20μL；
（d）檢測波長：276nm；
（e）流速：1.0mL/min；
（f）流動相：A：0.05%甲酸水溶液；B：乙腈；梯度洗脫程序見表1。
二、結果與討論
1、色譜條件的選擇
（1）檢測波長的選擇通過二極管陣列檢測器（DAD檢測器）在190～600nm處進行掃描，結果見圖1，發現胭脂紅酸在紫外區最大吸收波長為276nm，在可見光區最大吸收波長為494nm。為對兩個波長的檢測結果進行比較，本研究檢測波長同時選擇276nm和494nm。如圖2所示，胭脂紅酸在276nm處吸收峰響應值最大，峰形較好。在494nm處峰形最好，且雜質幹擾較小，但響應值不如276nm。為了達到更低的檢出限，減少定量誤差，試驗選擇檢測波長為276nm。
（2）流動相的選擇
本實驗選用TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）柱，通過實驗分別比較了不同類型、不同比例的流動相的分離效果。在考慮色譜柱的耐酸性能基礎上，實驗分別用純水、磷酸溶液、甲酸溶液作為水相，乙腈為有機相，共研究了乙腈-純水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-甲酸溶液三種體係對測定的影響。結果表明使用乙腈-純水作為流動相時，完全洗脫不出；使用乙腈-磷酸溶液作為流動相時，出峰時間較慢，峰形出現拖尾現象；使用乙腈-甲酸溶液作為流動相時，分離效果好，峰形對稱。
實驗發現，pH的降低有利於改善胭脂紅酸的峰形。本實驗比較了分別以0.01%甲酸溶液和0.05%甲酸溶液作為流動相的分離效果，如圖3。甲酸濃度為0.01%時，出峰時間延後，響應值足夠高，然而峰形出現拖尾現象，峰較寬且不對稱；甲酸濃度為0.05%時，響應值足夠高且峰形效果好。因此本實驗選擇乙腈-0.05%甲酸溶液體係作為流動相，梯度程序淋洗。
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