2、酵对姜油薑油樹脂添加量對R.oryzaeMG1生物量和發酵液pH的树脂影響

在20mLPDA液體培養基中分別添加薑油樹脂0μL、100uL.200μL、抗氧400uL、化活800uL，影响接入1%的酵对姜油R.oryzaeMG1孢子懸液，28℃震蕩(150/min)培養72h，树脂每8h取樣，抗氧測定培養物pH及菌絲濕重，化活繪製的影响生長量曲線和pH曲線如圖2、3所示。酵对姜油

由圖2可見，树脂隨著薑油樹脂添加量的抗氧增加，R.oryzaeMG1生長速率及細胞量逐漸遞減，化活說明薑油樹脂有一定的影响抑菌作用。在不添加薑油樹脂的情況下，R.oryzaeMG1在接種後16h進入對數期，且持續增長，72h後菌絲濕重8.72g；當薑油樹脂添加量為50μL時，MG1生長趨勢與不添加薑油樹脂時相近，但生長速率稍緩，在接種後24h為對數期，細胞量有所降低，72h後菌絲濕重8.22g；當薑油樹脂添加量為100uL時，生長速率明顯緩慢，約32h後才進入對數期，72h後菌絲濕重降為3.71g；當薑油樹脂添加量超過200μL時，MG1生長極緩慢，細胞量明顯降低，72h後菌絲濕重小於1.70g。上述分析表明，在0～100μL薑油樹脂添加量範圍內，對R.oryzaeMG1的生長繁殖影響不大，當添加量超過100μL時，表現出極強的抑菌能力。

由圖3可見，隨著薑油樹脂添加量的增加，培養物的pH持續上升；不添加薑油樹脂的情況下，經72h發酵，pH為2.81；隨薑油樹脂添加量的梯度，pH分別為2.77、2.96、3.13、3.43、3.62。上述分析表明，在0～100μL薑油樹脂添加量範圍內，MG1的代謝未受到明顯抑製，產酸能力較強，與圖2的分析相吻合。

由圖4可見，當液體培養基中不添加薑油樹脂時，MG1生長狀況良好，菌絲抱團，菌絲球大小均勻，培養液澄清；在薑油樹脂添加量在50～200uL時，菌絲一部分抱團，另一部分呈絮狀，培養液澄清；在薑油樹脂添加量達到400～800uL時，菌絲完全呈絮狀，培養液較混濁。說明R.oryzaeMG1對薑油樹脂的耐受能力約在100uL以內，與圖2、3的分析相吻合，而且絮狀的菌絲形態更有利於產酶，以此為基礎，進行後續薑油樹脂添加量單因素試驗。

3、R.oryzaeMG1發酵薑油樹脂條件的單因素試驗

（1）薑油樹脂添加量對抗氧化活性的影響

在20mLPDA液體培養基中分別添加薑油樹脂10μL、20μL、30μuL、40μuL、50μL、60uL、70μL、80μL、90μL、100μL、120μL、140μL、160uL、180μL、200μL，接入1%的MG1孢子懸液，35℃震蕩(150r/min)培養4d後薑油樹脂的抗氧化活性見圖5。

由圖5可見，在10～70μL薑油樹脂添加量範圍內，發酵後薑油樹脂TAC逐漸增加，當薑油樹脂添加量為70uL時，TAC為1964.67±6.09umol/g；當添加量大於70μL後，TAC逐漸降低，說明R.oryzaeMG1的生長受到抑製，生長代謝減緩，導致發酵後薑油樹脂的總抗氧化活性降低。因此選取70μL薑油添加量進行後續試驗。

（2）發酵溫度對抗氧化活性的影響

在20mLPDA液體培養基中添加70μL薑油樹脂，接種後在不同溫度下震蕩培養4d後薑油樹脂的抗氧化活性見圖6。

由圖6可見，薑油樹脂乳添加量為70uL，在20～35℃下發酵4d後，薑油樹脂的TAC逐漸升高。當溫度為35℃時，TAC為1980.13±8.60μmol/g；當溫度高於35℃後，TAC逐漸降低，說明R.oryzaeMG1生長代謝受到影響，發酵力降低，導致發酵後薑油樹脂的總抗氧化活性降低。因此發酵溫度35℃進行後續試驗。

（3）發酵時間對抗氧化活性的影響

在20mLPDA液體培養基中添加70uL薑油樹脂，接種後35℃培養不同時間，每天取樣測定抗氧化活性見圖7。

如圖7可見，薑油樹脂乳添加量為70μL，在35℃下發酵1～4d後，薑油樹脂的TAC逐漸增加，在發酵4d時，TAC為2003.9土5.45umol/g；當發酵時間超過4d後，TAC變化差異不顯著，說明隨MG1生長進入穩定期，發酵力趨於平穩，導致發酵後薑油樹脂的總抗氧化活性與之前無顯著性差異。因此，選擇發酵時間4d進行後續試驗。

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