目的肠道肠埃：為滿足腸道集聚性大腸埃希氏菌準確檢測的實驗室質量控製和能力驗證需求，研製具有我國自主知識產權且具有全基因組測序信息的集聚菌菌均勻穩定的腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體及gDNA標準物質。方法：利用二代高通量測序技術對腸道集聚性大腸埃希氏菌（CMCC44841）進行全基因組測序，性大希氏明確CMCC44841的体和種屬、血清分型、标准多位點序列分型和毒力基因。物质對CMCC44841進行astA、肠道肠埃aggR、集聚菌菌pic特征性基因PCR確認。性大希氏采用冷凍幹燥技術製備含量為103CFU/樣品的体和菌球和含量為20ng/樣品的gDNA小球。參照CNAS-GL017對20個菌球樣品進行均勻性檢驗，标准采用單因素方差分析對結果進行統計分析。物质將樣品分別於-20℃、肠道肠埃4℃、集聚菌菌25℃和37℃條件下保藏，性大希氏對其儲藏穩定性和運輸穩定性進行評價。組織3家實驗室進行協同標定和驗證。使用5種不同基質的即食食品樣本，按照國標法檢驗標準物質的適用性。結果：利用生物信息學分析，CMCC44841基因組大小為5.057285Mb，GC含量為50.6%，編碼區基因5173個。種屬鑒定結果為大腸埃希氏菌（Escherichiacoli），血清預測結果為O127:H21，MLST為ST40型，攜帶除aggR、astA、pic之外其他相關的毒力基因。PCR擴增出astA、aggR、pic片段大小分別為102bp、400bp和1111bp。菌體標準物質均勻性檢驗結果F=1.59，符合標準物質的要求。菌體和gDNA標準物質樣品於-20℃和4℃保藏60d，25℃保藏7d，37℃保藏5d後仍然穩定。經3家實驗室協同標定，菌體標準物質樣品含量均為103CFU/樣品。20件不同基質的食品樣品加入腸道集聚性大腸埃希氏菌標準物質進行檢驗，均可以檢出。結論：本研究所製備的腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體及gDNA標準物質所用菌株來源於我國國內分離菌株，且具有明確的全基因組序列信息，均勻性和穩定性均符合要求，適用性良好，能夠滿足食品檢測實驗室的質量控製和能力驗證的需求。
致瀉性大腸埃希氏菌所引起的腹瀉是世界範圍內存在的一個重要的公共衛生問題。根據毒力因子、致病機理和流行病學特征，致瀉性大腸埃希氏菌可分為5類：腸道致病性大腸埃希氏菌（enteropathogenic Escherichiacoli,EPEC）、腸道產毒性大腸埃希氏菌（enterotoxigenic Escherichiacoli,ETEC）、腸道出血性大腸埃希氏菌（enterohemorrhagic Escherichiacoli,EHEC）、腸道侵襲性大腸埃希氏菌（enteroinvasive Escherichiacoli,EIEC）以及腸道集聚性大腸埃希氏菌（Enteroaggregative Escherichiacoli,EAEC）。EAEC是一類新發現的致瀉性大腸埃希氏菌，已在世界各國引起散發或暴發。美國國立衛生研究院已將EAEC歸為B類生物恐怖病原體。我國各省市致瀉大腸埃希氏菌流行特征分析結果顯示，EAEC在食源性致瀉大腸埃希氏菌中最常見，為主要毒力基因型。因此食品中EAEC快速準確的檢測工作對預防和控製由其引起的細菌性食物中毒事件有著非常重要的作用。
EAEC傳統的鑒定方法包括分離培養、生化鑒定、血清學鑒定和16SrDNA鑒定等，這些方法實驗周期較長，且存在一定的局限性。目前PCR技術由於其靈敏度高可靠性強等優點被廣泛應用於EAEC的檢測中。國家標準GB4789.6-2016規定對生化反應符合大腸埃希氏菌特征的菌落進行集聚熱穩定性毒素A基因（enteroag gregative heat-stable enter otoxin A,astA）、集聚黏附菌毛調節基因（aggregative adhesive fimbriaere gulator,aggR）、腸定植因子基因（proteininvolve dinintestinal colonization,pic）三個特征性基因的PCR鑒定，每次PCR反應需要使用EAEC標準菌株及其gDNA作為陽性對照，以保證結果的準確性。由於複雜的食品基質背景、培養基、試劑、DNA提取、人員操作等原因可直接影響檢測結果的準確性，所以在檢測過程中需要穩定的微生物標準物質和DNA標準物質對整個檢驗過程進行質量控製，從而保證檢測數據的準確性和有效性。目前國內對於EAEC菌體標準物質及其基因組DNA（genomic DNA，gDNA）標準物質並未見相關的研究報道。
自21世紀初，基因測序技術取得突破性進展，基因測序獲得的數據量、測序速度和費用都得到大幅度改觀。在國內，單個微生物基因組測序的費用也從數萬元降低至目前幾百元。通過對食源性微生物基因組進行測序、組裝，能夠獲得90%以上的細菌DNA信息，包括種屬、耐藥基因、毒力因子、轉移元件等信息，可對多個細菌間的基因組信息進行比對分析，在細菌鑒定、耐藥機製和溯源等研究中發揮重要的作用。
本研究針對目前檢驗領域需求，利用高通量測序技術對腸道集聚性大腸埃希氏菌CMCC44841進行全基因組測序，研製基因組信息背景清晰、穩定性良好的即用型腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體和gDNA兩種標準物質，不僅能夠應用於食品檢測機構的質量控製和人員考核，而且可為我國食品安全檢測水平進一步提高、及時發現問題提供有力的技術支撐。
腸道集聚性大腸埃希氏菌（EAEC）CMCC44841來源於中國醫學細菌保藏管理中心。
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