③含乳的法测飲料

準確取2～5g（精確至0.0001g）樣品，加入1.0mL亞鐵氰化鉀溶液和1.0mL乙酸鋅溶液，定饮搖勻，料中加水定容至10mL，甜蜜渦旋混勻，素糖赛蜜5000r/min離心5min，精钠取上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，和安備用。法测

（2）標準曲線的定饮製作

將標準係列溶液經0.22μm微孔濾膜過濾，分別注入液相色譜-串聯質譜儀中，料中測定相應的甜蜜峰麵積，以標準工作液的素糖赛蜜濃度為橫坐標，以峰麵積為縱坐標，精钠繪製標準曲線。和安

③試樣溶液的法测測定

將試樣溶液注入液相色譜-串聯質譜儀中，以保留時間定性，同時記錄峰麵積，根據標準曲線得到待測液中3種添加劑的濃度。

定性判斷：試樣中目標化合物色譜峰的保留時間與標準色譜峰的保留時間一致，變化範圍應在（±2.5%）之內。待測化合物的定性離子的重構離子色譜峰的信噪比應≥3（S/N≥3），定量離子的重構離子色譜峰的信噪比應≥10（S/N≥10）。

目標化合物的質譜定性離子必須出現，至少應包括一個母離子和兩個子離子（甜蜜素為一個母離子和一個子離子），且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標化合物的兩個子離子的相對豐度比與濃度相當的標準溶液相比，其允許偏差不超過規定的範圍。

式中：x——樣品中待測組分的含量（μg/kg）；

C——測定液中待測組分的濃度（μg/L）；

C₀——空白中待測組分的濃度（μg/L）；

V——定容體積（mL）；

M——樣品稱樣量（g）。

二、結果與討論

1、流動相選擇

實驗中考察選用0.05%氨水-甲醇、5mmol/L乙酸銨-甲醇、10mmol/L乙酸銨-甲醇作流動相，實驗表明0.05%氨水-甲醇作為流動相三種目標物響應最高，10mmol/L乙酸銨-甲醇作流動相三種目標物響應最低。圖2為1.0mg/L混合標準溶液在不同流動相中的響應值。文獻報道中流動相選用鹽溶液，如10mmol/L乙酸銨、甲酸銨-乙腈，本文所用儀器為WatersAcquityUPLC-XEVOTQD，若使用10mmol/L乙酸銨-甲醇作為流動相，在儀器Intellistart功能中並不能找到目標化合物的MRM，手動優化發現目標化合物MRM響應很低。若使用5mmol/L乙酸銨-甲醇作為流動相Intellistart功能中並可以找到目標化合物的MRM，但與使用0.05%氨水-甲醇作為流動相相比，離子響應較低，XEVOTQD在負離子模式下，堿性環境更有利於化合物去氫生成負離子，因而文中選用0.05%氨水-甲醇作為流動相。

2、含乳飲料樣品前處理的優化

樣品不經淨化處理，基質抑製效應明顯，因此實驗中考察用三氯乙酸溶液（1g/L）、PSA分散固相萃取、乙酸鋅-亞鐵氰化鉀淨化樣品。三氯乙酸溶液是很好的蛋白沉澱劑，但三氯乙酸吸電子效應明顯，不利於三種目標化合物脫氫電離。PSA固相吸附劑，與NH2相似的吸附劑，有兩個氨基，比氨基柱更強的離子交換能力，弱陰離子交換（水溶性基質），用於去除有機酸、色素和金屬離子。用PSA分散固相萃取可以很好的去除飲料中的去除有機酸、色素和金屬離子，但它同時也會吸附部分糖精鈉和安賽蜜（見圖3），因而一般樣品經過濾後直接測定糖精鈉與安賽蜜含量，經PSA分散固相萃取後過濾測定甜蜜素含量，0.3～0.5gPSA用量可以得到較好的回收率。

2Zn²⁺+［Fe（CN）6］⁴⁺=Zn₂［Fe（CN）6］↓（白色），乙酸鋅與亞鐵氰化鉀反應生成的氰亞鐵酸鋅沉澱來挾走或吸附幹擾物質，這種澄清劑除蛋白質能力強，但脫色能力差。實驗中考察沉澱劑的用量：分別用乙酸鋅-亞鐵氰化鉀0.5～0.5mL、0.75～0.75mL、1.0～1.0mL、2.0～2.0mL、1.0～2.0mL（物質量之比1∶2）和2.0～1.0mL（物質量之比4∶1）處理5.0g樣品，實驗表明隻有當氰亞鐵酸鋅含量達到0.00075moL時，且按照化學計量反應比例加入沉澱劑，三種化合物的回收率才較好（見圖4），但過多的鹽溶液進入UPLC/MS/MS係統會在錐空上沉積，影響電離效率，因而本實驗選用沉澱劑用量為：乙酸鋅0.0002moL，亞鐵氰化鉀0.0001moL。對其他含乳樣品可以參考本實驗選擇合適的沉澱劑用量。

3、方法線性方程、檢出限和定量限

3種化合物工作標準曲線見表3，安賽蜜和甜蜜素在5～200μg/L範圍內，糖精在20～200μg/L範圍內，線性相關係數r＞0.995，20μg/L和200μg/L標準溶液連續進樣6次，精密度為8.6%和5.4%，方法檢出限（S/N=3）為0.2～10μg/kg，方法定量限（S/N=10）為0.6～30μg/kg，見表3。

4、樣品加標回收實驗

3種化合物在自製奶茶中三個級別添加量的回收率為78.9%～95.7%，在某品牌果茶中三個級別添加量的回收率為80%～102%，回收良好。見表4。

5、樣品檢測結果

測定5份定型包裝飲料與5份自製奶茶均未檢出3種添加劑。

三、結論

本文建立UPLC/MS/MS法測定飲料品中的甜蜜素、糖精鈉和安賽蜜的檢測方法，即一般樣品經過濾處理，檢測樣品中的糖精和安賽蜜的含量；經PSA分散式固相萃取後，檢測樣品中甜蜜素含量；含乳樣品經乙酸鋅-亞鐵氰化鉀去蛋白處理；用0.05%氨水-甲醇做流動相，負離子模式采集。與其他分析方法相比，操作簡單，檢出限低，重現性好，回收率良好，幹擾小，避免甜蜜素衍生反應，消除樣品基體抑製效應，適用於飲料樣品中3種添加劑的測定。

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