維生素E作為一種天然抗氧化劑，同步具有清除體內自由基、荧光維持細胞膜的法测完整和正常功能以及防止脂質過氧化等生理功能，蔬菜是定蔬人體攝取維生素E的主要來源，測定蔬菜中維生素E的菜中含量，對於評價它的维生營養品質具有重要意義。
測定維生素E的含量方法主要有比色法、薄層法、同步熒光法、荧光氣相法、法测高效液相色譜法等，定蔬比色法操作比較簡單，菜中但靈敏度較低;高效液相色譜法分辨率高，维生但操作複雜，含量成本高，同步對於大批量樣品測定比較困難;熒光法特異性強，幹擾少，靈敏，快速，簡便，對於測定大批量蔬菜中的維生素E是一種比較理想的方法。但普通熒光光譜法存在萃取劑石油醚對維生素E有幹擾，使測定結果準確性低的缺點。本實驗探討了采用同步熒光光譜法測定蔬菜中維生素E，該方法消除了石油醚的幹擾，提高了實驗的準確性。
1實驗部分
1,1試劑與儀器
維生素E(Sigma公司，進口分裝)，用時未經進一步純化，溶於無水乙醇。其他試劑均為國產分析純，所用溶液均用二次去離子水新鮮配製。
日立F-4500型熒光分光光度計(日本日立公司)。
1,2樣品的製備與光譜測定
維生素E采用周鬆的方法提取。吸取一定量的維生素E提取液於20mL棕色帶塞試管中，加入5.0mL分析純石油醚振蕩1min，靜置分層後(如有乳化現象，加少許無水乙醇)，用注射器移去下層，上層石油醚分別用蒸餾水洗滌2～3次固定激發波長λex=295nm，在λem=300～500nm掃描維生素E普通熒光光譜;固定Δλ=30nm，λex=200～400nm下，測定同步熒光光譜，記錄其λex=295nm處的熒光值。
2結果與討論
2,1維生素E的激發光譜和熒光光譜
用含維生素E2.0mg/L的標準乙醇溶液作校正光譜多次實驗表明，維生素E的激發光譜和發射光譜均為λex295nm/λem327nm，結果見圖1和圖2，與項光華、李豔飛等人的報道相符。
2,2石油醚和維生素E的熒光光譜、同步熒光光譜
按照實驗方法，掃描石油醚和維生素E(10.0mg/L)的熒光光譜和同步熒光光譜並進行比較，結果發現，溶劑和維生素E在λem=327nm處熒光發射光譜相互重疊(圖3)。從兩者的同步熒光光譜可以看出，同步熒光法使2種物質分別在λ=250nm和λ=290nm處有最大發射(Δλ=30nm)，從而消除了石油醚對維生素E測定的影響(圖4)。
2,3不同Δλ對維生素E同步熒光光譜的影響
采用同步熒光法測定蔬菜中的維生素E時，光譜形狀不僅與物質本性有關，且與Δλ有關，Δλ越小，形成的同步光譜峰數越小、峰形越窄，但Δλ不能太小，隻有當Δλ與發射峰、激發峰之間的波長相匹配時，才能產生比較強的熒光信號。2峰的分離情況通常用分離度R表示，當R<1時，2峰有部分重疊;R≥1時，表示2峰能明顯分離，滿足分析要求;R=1.5時，表示2峰能完全分離。
本實驗分別測定了Δλ為10、20、30、40、50nm時維生素E和溶劑的同步熒光光譜，從圖5和表1可以看出，Δλ為10、20、30nm時，隨著Δλ的增加，同步熒光的熒光強度逐漸增強且三者R>1，綜合圖5和表1，Δλ=30nm時，維生素E的同步熒光光譜的熒光強度最大，且能夠與溶劑的熒光光譜分離開，因此在實際測定中選擇了Δλ為30nm。
2,4線性範圍
將維生素E標準液配製成不同質量濃度的係列溶液，按上述測定方法進行測定，結果表明，其質量濃度在0.01～10mg/L內與其熒光強度成線性關係(圖6)，回歸方程為I=16.173ρ+1.1235，I為熒光強度，ρ為質量濃度，相關係數r=0.9995，檢出限為0.0025mg/L。
2,5回收實驗
取同等質量的油菜樣品，分別加入一定量的維生素E的標準溶液，按上述測定方法分別進行處理、測定，計算樣品中維生素E的回收率(表2)。從表2可以看出，回收率為101.18%～101.58%，平均回收率為101.37%。
2,6實際樣品的測定
用上述的實驗方法測定實際樣品中維生素E的含量，測定結果見表3，從表3可以看出，相對標準偏差為2.4%，1.17%，說明實驗的重複性較好，實驗結果比較滿意。
3小結
通過熒光光譜學對蔬菜中維生素E含量研究表明，以石油醚作萃取劑時，普通熒光光譜法不能夠消除萃取劑對維生素E的幹擾，采用同步熒光光譜法，當Δλ=30nm時維生素E的熒光強度最強，且能消除萃取劑石油醚的幹擾作用。而且在0.1～10mg/L內熒光強度和維生素E濃度呈線性關係，回歸方程為I=16.17ρ+1.1235，相關係數r=0.9995，樣品的平均回收率為101.37%，實際樣品測定結果的相對偏差(RSD)<5，0%，該法操作簡便，快速，準確性高，重複性好，對大批量測定蔬菜中維生素E不失為一種理想的方法。
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