維生素C又稱L-抗壞血酸,紫外是分光法测人體正常生理代謝所必不可少的一種維生素,能調節人體氧化還原代謝反應,光度果中增強人體對外界環境的定水抗應激能力以及免疫能力,水果中VC含量豐富,维生是含量人體VC重要攝取來源之一。目前,紫外測定VC的分光法测方法有高效液相色譜法、熒光法、光度果中2,定水6-二氯靛酚滴定法、電化學分析法,维生本文采用紫外-可見分光光度法對VC的含量穩定性、最佳提取條件和10種常見水果的紫外VC含量進行了考察與測定,為人們鑒定水果營養價值及儲存方式提供一定的分光法测參考。
1材料與方法
1.1材料
獼猴桃、光度果中冰糖橙、橙子、桔子、草莓、油桃、火龍果、菠蘿、梨、蘋果均購自某農貿市場;抗壞血酸標準品(AR);冰乙酸(AR);磷酸(AR);鹽酸(AR);草酸(AR)。
1.2儀器
UV759CRT紫外-可見分光光度計(上海佑科儀器有限公司);JY電子天平(上海方瑞儀器有限公司);GZX-9246數顯鼓風幹燥箱(上海博迅實業有限公司)。
1.3提取工藝流程
水果樣品→去蒂、清洗→研磨成勻漿→稱取試樣→加入提取劑→避光環境下浸提→4000r/min離心處理→紫外-可見分光光度計測定(243nm)其吸光度→計算質量
1.4實驗方法
準確稱取5.0000g預處理後的樣品勻漿於燒杯中,按料液比(g∶mL)1∶2的比例加入2%醋酸溶液,在室溫(20℃)避光環境中浸提30min,將浸提液在4000r/min條件下離心處理10min,取上層清液定容至100mL容量瓶後,用紫外可見分光光度計在最大吸收波長243nm處測定吸光度。每組試樣做七次平行試驗,取其平均值,根據維生素C標準曲線計算得出樣品中維生素C的含量。
1.5紫外吸收曲線的測定
為了考察樣品維生素C的含量,采用濃度為0.08mg/mL的標準應用液和樣品溶液在紫外-可見分光光度計上進行波長掃描,紫外吸收曲線見圖1和圖2。
由圖1及圖2可以看出維生素C標準品的λmax=243nm,水果樣品的λmax=244nm,它們的最大吸收波長幾乎一致,這說明維生素C在酸性溶液中的最大吸收波長為243nm。
1.6結果計算
將待測液的吸光度值代入維生素C標準曲線,查出待測樣品濃度,再根據公式計算出樣品中VC的含量。
2結果與討論
2.1VC提取正交實驗結果分析
通過對料液比、醋酸濃度、提取時間、提取溫度等單因素對VC提取效果的分析,進行正交實驗。為了確定最佳提取效果,以提取液在λmax=243nm處吸光度為評判指標,對以上四個因素設計L9(34)正交實驗,因素水平表見表1,正交實驗結果見表2。
由表2可以看出,以上四個因素對VC提取效果的影響的主次順序依次為A>B=C>D,即:料液比>醋酸濃度=提取時間>提取溫度。從正交分析數據可以得出,維生素C的最佳提取條件為A1B1C1D1,即:料液比1∶2(g∶mL)、醋酸濃度2%、提取時間30min以及提取溫度20℃。
2.2維生素C標準曲線的繪製
本實驗采用紫外-可見分光光度法對VC的含量進行了測定,將1mg/mL的VC標準儲備液梯度稀釋為0.02,0.04,0.08,0.12,0.16,0.20mg/mL的係列溶液分別檢測其吸光度。以質量濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標繪製維生素C標準曲線(見圖3)。
由圖3可以看出,維生素C在濃度為0.02~0.20mg/mL之間符合朗伯-比爾定律,有良好的線性關係,所得回歸方程為Y=3.7994X-0.0066;相關係數R2=0.9996。
2.3樣品含量測定
選取新鮮水果桔子、草莓、橙子、紅心火龍果等10種樣品測定其中VC的含量,根據不同水果樣品下測得的吸光度,在維生素C標準曲線中讀出提取濃度,計算得出不同水果樣品提取質量的柱狀關係圖,如圖4。
由圖4可以得出,水果樣品中維生素C含量順序為獼猴桃(407.58mg/100g)>冰糖橙(390.86mg/100g)>橙子(319.31mg/100g)>桔子(284.65mg/100g)>紅心火龍果(253.32mg/100g)>草莓(244.76mg/100g)>油桃(201.01mg/100g)>菠蘿(181.44mg/100g)>梨(170.95mg/100g)>蘋果(144.95mg/100g)。
2.4方法檢出限
分別測定試劑空白8組,其吸光度值見表2.3,在置信度約為99%時,其檢出限MDL=t(n-1.099)×S=0.003mg/mL。
2.5精密度
實驗對10種水果樣品分別製備7個平行樣,檢測其吸光度,計算含量。測得相對標準偏差(RSD)在0.09%~0.58%之間,精密度較好。
2.6加標回收率
采用樣品加標的方法進行加標回收率測定,取三份樣品加入不同濃度的標液測定其吸光度,平行測定6組,加標回收率在96.6%~106.8%之間。
3結論
本文采用紫外分光光度法對生活中常見的水果中VC的含量進行測定分析,結果表明低濃度的醋酸在冷藏避光的條件下對維生素C具有一定的保護作用。通過單因素實驗和正交實驗得出:料液比對VC浸提效果影響較大,溫度對提取效果影響較小,料液比1∶2(g∶mL),濃度2%,時間30min,溫度為20℃時是最佳提取條件。測定結果表明:獼猴桃中VC含量較高,為407.58mg/100g,蘋果中的VC含量相對較低,為144.95mg/100g。該方法檢出限為0.003mg/mL,RSD<1%,回收率在96.6%~106.8%之間,本方法檢測水果中VC的含量可以得到較好的結果。
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