蘆丁（Rutin），面法又名芸香苷，优化屬於多羥基黃酮類化合物，槐米具有抗炎、中芦抗病毒、溶剂热法抗腫瘤、工艺降血脂等多種藥理作用，面法在臨床上主要用於治療高血壓、优化糖尿病、槐米心血管疾病等多種疾病。中芦此外，溶剂热法蘆丁還作為原料被應用於醫藥、工艺保健品和化妝品行業，面法是优化一種極具開發潛力的天然活性物質。蘆丁廣泛存在於槐米、槐米桑葉、苦蕎麥、小薊等植物中，其中槐米中的含量較為豐富，是工業提取蘆丁的主要原料。
槐米（Flossophorae），豆科植物槐樹（SophorajaponicaL.）的幹燥花蕾及花。在中醫臨床上作為止血劑，用來治療痔瘡、子宮出血，並有清肝瀉火、治療肝熱目赤的功效。目前從槐米中提取蘆丁的方法主要有堿溶酸沉法、醇回流法、微波法和超聲法，但這些提取方法存在一定的不足之處，如堿提酸沉法提取率低；醇回流法提取時間長；微波法和超聲法使用的超聲發生器和微波儀價格昂貴，提取成本較高。因此，探尋一種新的高效、快速、便捷的提取方法就顯得尤為重要。
溶劑熱法是納米材料和功能材料合成的常用方法，其主要原理是以有機物或有機物的水溶液為反應溶劑，通過調控反應溫度，使密閉體係內的壓力升高，從而使得溶劑在高於正常溶劑沸點溫度的情況下仍保持液體狀態，但其物理化學性質，如，表麵張力、極性、氫鍵等發生改變，進而提高反應速度和產物提取率。目前尚未見應用溶劑熱法提取蘆丁的文獻報道，因此本試驗對該提取方法進行了研究，並采用響應麵法對該法進行了優選，以期為蘆丁的提取提供一種新方法，同時也為槐米的深度開發提供參考。
一、材料與方法
1、材料與儀器
槐米（洛陽中藥材市場，粉碎過80目篩，備用）；冰乙酸（分析純），天津市科密歐化學試劑有限公司；蘆丁對照品，大連美侖生物技術有限公司；甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司；水為超純水。天美LC2000液相色譜儀，上海天美科學儀器有限公司；CT14RD高速離心機，上海天美生化儀器設備有限公司；BT125D雙量程電子分析天平，德國多利斯公司；聚四氟乙烯內襯的不鏽鋼反應釜，福建物質結構研究所；PHG9246A電熱恒溫鼓風幹燥箱，上海精宏實驗設備有限公司。
2、試驗方法
（1）色譜條件
色譜柱：KromasilC18柱子（250×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；檢測波長：360nm；進樣量：20μL；柱溫：室溫。
（2）蘆丁標準曲線的繪製
精密稱取蘆丁對照品10.0mg，50%甲醇溶液定容於200mL容量瓶中，移取蘆丁對照品溶液5mL、10mL、15mL、20mL、25mL分別置於100mL容量瓶中，50%甲醇定容。按照色譜柱：KromasilC18柱子（250×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；檢測波長：360nm；進樣量：20μL；柱溫：室溫色譜條件進樣，采用峰麵積外標法繪製蘆丁濃度（X）與峰麵積（Y）的回歸方程。
（3）單因素試驗
稱取槐米0.20g，置於25mL聚四氟乙烯內襯的不鏽鋼反應釜中，加入一定濃度的乙醇溶劑，在設定的條件下（考察乙醇濃度、提取時間、提取溫度、液料比）進行提取。提取結束後，自然冷卻至室溫。移取2.0mL提取液以8，000r/min離心3min，取上清液0.5mL於100mL容量瓶中，50%甲醇定容，搖勻，過0.45μm濾膜，取續濾液作為供試液。檢測蘆丁含量，按下式計算樣品中蘆丁的提取率Y。
蘆丁提取率Y（%）=C×V×n/104M；
式中C為提取液中蘆丁濃度（μg/mL），V為提取溶劑的體積（mL），n為稀釋倍數，M為槐米質量（g）。
（4）響應麵試驗設計
在單因素試驗基礎上，依據Design-Expert8.0.6.1軟件中的CentralComposite設計原理，選乙醇濃度（A）、提取時間（B）、提取溫度（C）和液料比（D）為4個考察因素，蘆丁提取率（Y）為響應值，進行四因素五水平的試驗設計，以確定槐米中蘆丁最佳提取工藝條件。因素水平表見表1。
二、結果與分析
1、蘆丁含量的測定
圖1是蘆丁標準品和樣品的高效液相譜圖。從圖中可以看出，在以上色譜條件下，蘆丁峰形對稱，可用於溶液中蘆丁含量的測定。同時，以峰麵積為縱坐標（Y），蘆丁濃度為橫坐標（X），得到蘆丁的標準曲線方程為：Y=32120X-12042，R2=0.9993。蘆丁濃度在2.5～12.5μg/mL範圍內線性關係良好。
2、單因素試驗分析
（1）乙醇濃度
稱取0.20g的槐米粉末5份，分別加入水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇和乙醇16mL於聚四氟乙烯的反應釜內，90℃提取30min，結果見圖2。從圖中可以看出，乙醇濃度低於50%時，隨著乙醇濃度的升高，蘆丁提取率隨之升高。原因可能是由於乙醇的滲透能力較強，增加乙醇濃度提高了蘆丁在提取溶劑與細胞基質之間的溶解平衡，所以乙醇濃度升高有利於蘆丁的提取。但蘆丁的極性較大，繼續提高乙醇濃度，溶劑的極性變小，根據相似相溶原理，蘆丁的溶解度會隨之變小，因此蘆丁的提取率降低。因此，選擇乙醇溶度為50%較為適宜。
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