2.4　菌齡對原生質體產量與再生率的外部影響

試驗結果如圖3，當菌齡低於4天，环境隨著菌齡的条件体产增加，原生質體的对香的影產量也會增加，當菌齡高於4天時，菇原隨著菌齡的生质生率增加，原生質體的量再再生率逐步降低；當菌齡大於6天時，原生質體再生率急速下降。外部經過回歸方程計算可以得出：原生質體再生率在5.4天時達到最高，环境約為2.07%；原生質體的条件体产產量在4.1天時達到頂點，為2.01×108個/毫升。对香的影

2.5　穩滲劑種類對原生質體製備產量與再生率的菇原影響

圖4可以看出，當選取甘露醇作為滲穩劑時，生质生率原生質體的量再產量最高但是再生率很低，當使用硫酸鎂作為穩滲劑時，外部原生質體的產量排名第三，僅處於甘露醇和葡萄糖作為滲穩劑之後；硫酸鎂的再生率為1.73%，葡萄糖的再生率為1.60%，此再生率僅次於用蔗糖當作穩滲劑的再生平板，蔗糖的再生率為1.94%。由於在製備原生質體時，使用硫酸鎂當作穩滲劑，不但能夠較好的維持菌絲體細胞膜內外滲透壓的穩定性，同時滲穩劑中的Mg2+也能夠通過交聯羧基和磷脂質實現維持細胞膜穩定的作用。但是Mg2+的供能能力較差，難以維持細胞壁再生所需要的能量，同理單糖也無法實現此項需求。因此，想要實現原生質體再生率最大化，應該選用硫酸鎂作為製備滲穩劑，蔗糖作為再生滲穩劑。

2.6　穩滲劑濃度對原生質體產量與再生率的影響

圖5可以看出，滲穩劑濃度對於原生質體的產量和再生率都能產生影響，當使用純淨水作為參照時，目標菌絲的原生質體產量是4.2×107個/毫升，原生質體的再生率為0。在此基礎上不斷加大滲穩劑的濃度，可以看出原生質體的產量和再生率均呈現先增大後減小的變化。通過觀察試驗曲線可以發現，當滲穩劑濃度低於0.2摩爾/升時，隨著度增加，原生質體再生率提升明顯，此後隨著濃度增加原生質體再生率無明顯變化；經過回歸方程計算：當滲穩劑濃度為0.51摩爾/升時，原生質體產量達到最高1.85×108個/毫升，當穩滲劑的濃度為0.33摩爾/升的時候，原生質體的再生率會達到最大值1.97%。

2.7 pH對原生質體產量與再生率的影響

通過觀察下圖6，可以發現當滲穩劑pH處於3～4時，原生質體的產量基本上是穩定沒有變化，原生質體的再生率為0；當處於4～5時，對於原生質體的產量和再生率都有顯著的提升刺激；當處於5～7時，原生質體的產量與再生率都會出現不同程度的下降，回歸分析後得出，當pH為5.10時，原生質體的產量可達到最大值，為2.34×108個/毫升，當pH為5.69時，原生質體的再生率可達到最大值，為1.86%。

3 小結與討論

供給試驗使用的幾種因素在固定限度之中時，都能夠提升原生質體的產量以及再生率，並且具有明顯的效果。原生質體的最佳製備條件為，在pH為5.0的條件下，使用0.5摩爾/升硫酸鎂作為穩滲劑，在溫度達到28℃的時候對5日齡菌絲進行酶解3小時。最佳再生條件為，在pH為5.5的條件下，使用0.5摩爾/升蔗糖作為穩滲劑，在溫度達到27.8℃的時候對6.5日齡菌絲進行酶解2.9小時。

酶活和酶解的反應時間將會決定原生質體的產量大小，各種因素對原生質體的產量所造成的影響效果由小到大依次為，滲穩劑、齡、菌酶解時間、酶解溫度。同時，酶活性受到酶解液pH和酶解溫度的影響，進而影響原生質體產量。當pH為4.5～6.0範圍內，則45～55℃為纖維素酶的最適宜溫度，30～37℃為蝸牛酶的最適宜溫度，酶促反應的快慢與酶活性成正相關關係；同時混合酶的酶解效果要比單一酶效果顯著；在單位時間內，混合酶產生的原生質體的數量要大於單一酶所產生的原生質體的數量。

原生質體活性的大小可直接決定原生質體再生率的大小，本次研究中選取的各項因素對於原生質體再生率影響效果由小到大分別是，酶解溫度、菌齡、酶解時間、滲穩劑濃度。滲穩劑的濃度過大會導致原生質體失水失活、滲穩劑濃度過小會導致原生質體脹破，這都會影響原生質體的再生率。當反應酶處於其適宜反應條件時，酶解的反應比較快速，因為混合酶係能夠對各種各樣的底物進行酶解反應，但是，隨著酶解時間不斷增加，原生質體膜暴露時間過長會導致其細胞壁再生下降。因此，原生再生率也將會減弱。溫度為（25±1）℃時，是香菇菌絲和原生質體的最佳生長溫度，過高或者過低均會影響再生率。

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