紐莫康定B₀(Pneumocandin B₀)是高压棘白菌素類化合物，其半合成衍生物卡泊芬淨(Caspofungin)已被美國食品藥品監督管理局(FDA)批準用於治療無效或無法耐受其他抗真菌藥的制备中试患者的侵襲性曲黴病。作為合成真菌藥物卡泊芬淨的纽莫中間體，紐莫康定B₀由真菌Zalerion arboricola發酵產生，康定發酵過程中會產生與紐莫康定B₀結構相近的研究副產物及大量的色素。按照結構中脯氨酸上取代基的高压不同主要分為A₀，B₀和C₀，制备中试其中B₀，纽莫C₀分別為同分異構體。康定由於C₀為B₀生產過程中的研究關鍵雜質，在生產純化過程中去除C₀有一定的高压難度。因此，制备中试開發出一種有效的纽莫方法得到高純度的紐莫康定B₀對於後續合成卡泊芬淨尤為重要。

色譜分離法在化合物的康定分離中應用較為廣泛，且色譜純度、研究回收率和分離效率等方麵遠遠優於傳統的製備方法，其中色譜純度通過麵積歸一化法得到。相比於中低壓色譜製備，高壓色譜製備效率高、柱效高。筆者以實驗室製得的紐莫康定B₀粗品為原料，通過高壓製備對紐莫康定B₀進行了放大中試研究，開發出了一種生產周期短、成本低和色譜純度高的製備工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

U3000高效液相色譜儀，賽默飛Thermo公司；Cs-prep150工業製備色譜係統，漢邦科技；R-1001N型旋轉蒸發儀，鄭州長城科工貿有限公司；SHB-B95型循環水式多用真空泵，鄭州長城科工貿有限公司；DHJK-2020低溫冷卻循環泵，鄭州科泰實驗設備有限公司；SCIENTZ-12ND冷凍幹燥機，寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 試 藥

工業級二氯甲烷，山東金嶺化工股份有限公司；工業甲醇，兗礦國宏化工有限責任公司；改性矽膠，蘇州納微科技股份有限公司；紐莫康定B₀粗品，魯南新時代生物技術有限公司提供，質量分數81.20%;紐莫康定B₀對照品，大同市礦區風華生物科技有限公司，質量分數95.56%，批號16001;紐莫康定C₀對照品，大同市礦區風華生物科技有限公司贈與，質量分數95.11%，批號16002;乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 實 驗

2.1 HPLC(高效液相色譜)法測定B₀

紐莫康定B₀檢測方法：Thermo Hypersil GOLD C18，4.6 mm×250 mm， 5 μm; 以V(乙腈)∶V(水)=45∶55為流動相，等度洗脫；檢測波長210 nm， 柱溫40 ℃，進樣量10 μL，流量1 mL/min， 運行時間45 min。以紐莫康定B₀對照品進行外標法定量。紐莫康定B₀對照品溶液的配製：取紐莫康定B₀對照品約20 mg， 精密稱定，置於50 mL容量瓶中，加乙醇超聲溶解後，稀釋至刻度，搖勻，製得質量濃度為400 mg/L的紐莫康定B₀對照品溶液。供試品溶液配製：對製備液用氮氣吹幹，加乙醇振搖使溶解並稀釋至質量濃度約1 000 mg/L，搖勻，用0.22 μm有機濾頭過濾。紐莫康定B₀的結構式為

2.2 HPLC(高效液相色譜)法測定C₀

檢測方法為公司自行開發，線性梯度洗脫程序如表1所示。Welch Ultimate HILIC Amide柱，4.6 mm×250 mm， 3.5 μm; 波長220 nm， 流量1.0 mL/min， 進樣量10 μL，柱溫40 ℃，流動相A為水，流動相B為乙腈。

以紐莫康定C₀對照品進行外標法定量，紐莫康定C₀對照品溶液的配製與紐莫康定B₀對照品溶液的配製相同。紐莫康定C₀的結構式為

聲明：本文所用圖片、文字來源《發酵科技》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係刪除

相關鏈接：脯氨酸，卡泊芬淨，二氯甲烷