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发芽糙米糖蛋白抗炎、降血糖性能分析(二)

来源:时间:2025-04-22 03:14:26

1.3.3 GBRG降血糖作用研究

1.3.3.1 各組分GBRG對α-葡萄糖苷酶抑製活性的发芽分析測定

將各組分GBRG配成0.5mg/mL的溶液,取0.60mL磷酸緩衝液(0.05mol/LpH6.8)和0.20mLα-葡萄糖苷酶酶液(0.2U/mL)與0.10mL各組分GBRG液分別進行混合,糙米作為待測樣品,糖蛋將樣品37℃水浴10min後,白抗加入20mmol/L的炎降PNPG溶液0.20mL。5min後加入1mL1mol/L的血糖性Na2CO3溶液終止反應。對照組為阿卡波糖,发芽分析405nm處測定其吸光值,糙米並計算各組分GBRG對α-葡萄糖苷酶的糖蛋抑製率,篩選出抑製α葡萄糖苷酶的白抗活性最顯著的糖蛋白組分進行後續研究。

1.3.3.2 具有α-葡萄糖苷酶抑製作用的炎降GBRG組分的抑製率及半數抑製濃度的測定

將篩選出對α-葡萄糖苷酶活性抑製作用最明顯的GBRG組分溶解,配成1.00,血糖性0.50,发芽分析0.20,糙米0.10,糖蛋0.05,0.01mg/mL備用,按照1.3.2.1節所述方法,求出50%抑製率對應的α-葡萄糖苷酶抑製劑的濃度,即為GBRG組分的半數抑製濃度(IC50)。α-葡萄糖苷酶抑製率計算公式為(1)。

式中:a—無樣品α-葡萄糖苷酶溶液的吸光值;b—無樣品也無α-葡萄糖苷酶的吸光值;c—有樣品的α-葡萄糖苷酶混合溶液的吸光值;d—無α-葡萄糖苷酶樣品的吸光值。

1.3.3.3 各組分GBRG對α-澱粉酶抑製活性的測定

用α-澱粉酶(2U/mL)溶液0.2mL各組分GBRG溶液(1mg/mL)在37℃預混合10min,以0.3mL5%的澱粉溶液為底物,孵育15min。加入2mLDNS試劑,100℃加熱15min,測定其在540nm處的吸光度。試驗重複3次,取平均值。

1.3.3.4 具有α-澱粉酶抑製作用的GBRG組分

對α-澱粉酶的抑製率及半數抑製濃度的測定選擇對α-澱粉酶具有最明顯抑製作用的GBRG組分配成0,0.2,0.4,0.6,0.8,1mg/mL溶液備用,按照1.3.2.3節所述方法,求出50%抑製率對應的α-澱粉酶抑製劑的濃度,即為GBRG組分的半數抑製濃度(IC50)。α-澱粉酶的抑製活性計算公式為(2)。

式中:Ac—不加樣品的α-澱粉酶溶液吸光度;A'c—不含樣品和α-澱粉酶的吸光度;As—含樣品但不含α-澱粉酶的吸光度;A's—無α-澱粉酶的樣品溶液吸光度。

2 結果與討論

2.1 GBRG的抗炎作用研究結果分析

2.1. 1不同GBRG組分對細胞增殖影響結果

MTT法測定不同濃度WEG、SEG-1和SEG-2糖蛋白組分對RAW264.7存活率的影響結果如圖1所示。

由圖1可知,糖蛋白在低濃度時,對經LPS誘導後的RAW264.7細胞生長並無抑製效果,細胞的存活率較高;在中濃度時,抑製的作用稍顯提高,細胞的存活率下降,但基本高於對照組;高濃度時,抑製作用減弱,細胞存活率有所提升。結果表明:當糖蛋白溶液質量濃度在0.025~0.2mg/mL時,對RAW264.7細胞沒有毒性且細胞存活率高於對照組

2.1.2 RT-PCR測定細胞因子TNF-α、COX-2、IL-1β和iNOS的表達結果

2.1.2.1 糖蛋白WEG對LPS誘導的RAW264.7細胞炎症因子表達的影響

糖蛋白WEG對LPS誘導的RAW264.7細胞炎症因子表達如圖2所示。

由圖2可知,與空白組相比,經1μg/mL的LPS誘導1d後,可以增加小鼠巨噬細胞RAW264.7iNOS、COX-2、TNF-α與IL-1βmRNA的相對表達水平(P<0.01),其值分別為1.03,0.873,0.891與0.911。WEG和誘導後的RAW264.7細胞一起培養1d後,和LPS的對照組相比,低劑量組均可以調節iNOS、COX-2及IL-1βmRNA的相對表達水平,而中、高劑量組iNOS、COX-2和IL-1βmRNA的相對表達水平顯著下降(P<0.05),降至最低值各為0.571,0.549,0.544;對於炎症因子TNF-α,低、中、高劑量都可降低mRNA的相對表達水平,從0.648降至0.247,且呈劑量依賴關係。

2.1.2.2 糖蛋白SEG-1對LPS誘導得RAW264.7細胞炎症因子表達的影響

糖蛋白SEG-1對LPS誘導的RAW264.7細胞炎症因子表達如圖3所示。

由圖3可知,與空白組相比,經1μg/mL的LPS誘導1d後,炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA的相對表達水平極顯著上升(P<0.01),分別達到1.341,1.387,0.871和0.915。低劑量的SEG-1對iNOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA的相對表達水平有顯著的降低作用(P<0.05),分別降至0.967,1.053,0.72和0.693。中、高劑量的SEG-1對於IL-1β、TNF-α、COX-2和iN-OSmRNA的相對表達水平有極顯著的作用(P<0.01),尤其是在對TNF-α炎症因子上。各表達水平最低降至0.574,0.587,0.221和0.492。

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