當前對映異構體（對映體）的加替究拆分方法主要包括高效液相色譜法（HPLC）、毛細管電泳法（CE），沙星其中HPLC法又分為柱前衍生法、对映手性流動相添加法和手性固定相法。异构柱前衍生法前處理複雜且時間長；以CuSO4和手性氨基酸為手性流動相的体拆方法已普遍用於喹諾酮類藥物對映體的拆分，原理為待測物可與Cu2+及手性氨基酸形成三元非對映體配位化合物而分離，分研該法適用於手性碳原子與手性配合部位距離較近的加替究化合物分離，如氧氟沙星、沙星帕珠沙星等，对映但對於手性碳與手性配合部位距離較遠的异构藥物卻無法拆分，如手性碳在呱嗪側鏈上的体拆洛美沙星和加替沙星，熊正平等嚐試采用過L-脯氨酸與CuSO4的分研手性流動相添加劑法來拆分洛美沙星對映體未能成功。
手性固定相法利用藥物對映體和固定相之間所形成的加替究非對映體複合物穩定性差異而實現對映體的拆分，雖然手性色譜柱較貴，沙星但優點是对映適用於不含活潑反應基團的化合物，且樣品處理步驟簡單，現已廣泛應用在藥物對映體拆分上。本文利用以鍵合了苯基氨基甲酸酯化β-環糊精的手性色譜柱（ChiralCD-Ph）對加替沙星對映體進行了拆分研究。
LC-AD高效液相色譜儀，METTLERMS205DU電子天平。
加替沙星對照品（130518-200402，含量：97.2%；旋光度測定為0°，認為左右旋加替沙星比例為1∶1）；加替沙星片（180801）；水為純化水，HClO4和NaClO4為分析純，甲醇、乙腈為色譜純。
流動相：0.5mol·L-1NaClO4溶液（用HClO4調節pH值至4.0）-甲醇（53∶47）；流速：1.0mL·min-1；色譜柱為ChiralCD-Ph（4.6mm×250mm，5μm）；柱溫40℃；進樣量10μL；檢測波長：292nm。
精密稱取加替沙星對照品適量，加50%的甲醇溶解並稀釋成含加替沙星約為2mg·mL-1的對照品溶液。取加替沙星片研細，精密稱取適量，用50%的甲醇溶解並稀釋成含加替沙星約為1mg·mL-1的供試品溶液。
分別以甲酸銨、KH2PO4和NaClO4作為流動相對加替沙星進行拆分，結果顯示甲酸銨和KH2PO4係統均無法拆分加替沙星，而NaClO4係統有拆分加替沙星的可能。以NaClO4為水相，分別以甲醇和乙腈為有機相對加替沙星進行拆分，結果顯示乙腈拆分效果很差，幾乎無法拆分加替沙星，而甲醇拆分效果較好，最終選擇甲醇進行研究。
以NaClO4-甲醇為流動相，嚐試NaClO4濃度為0.1、0.3和0.5mol·L-1時對拆分結果的影響，結果兩對映體間分離度分別為1.092、1.483和1.602，最終選擇濃度為0.5mol·L-1的HClO4進行研究。
甲醇50%時對映體保留時間約為34min，對映體間分離度1.498；加大甲醇比例兩對映體間分離度更小，減少比例分離度有加大趨勢，但保留時間太長，綜合考慮選擇甲醇比例為47%進行研究。
對照品溶液，按“2.1”中色譜條件進行測定，色譜圖詳見圖2。圖譜顯示加替沙星兩個對映體間保留時間分別約為34和39min，兩對映體峰間的分離度為1.6，符合《中國藥典》2015年中待測物質色譜峰間的分離度應大於1.5的要求。
取對照品溶液適量，分別加50%甲醇分別稀釋成含加替沙星100、250、500、750、1000和1500μg·mL-1的溶液（單個對映體濃度為加替沙星濃度的50%），按“2.1”中色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以加替沙星單個對映體的峰麵積為縱坐標（y），加替沙星單個對映體的濃度為橫坐標（x）繪製標準曲線。結果表明，加替沙星單個對映體濃度在50～750μg·mL-1之間與相應峰麵積呈良好線性關係。對映體1回歸方程為：y=52819x+44509，r2=0.9999；對映體2回歸方程為：y=56850x+404273，r2=0.9999。
取加替沙星濃度約為1mg·mL-1的對照品溶液，按“2.1”中色譜條件連續進樣6針，記錄色譜圖。按“2.2”中方法分別製備6份供試品溶液，按“2.1”中色譜條件分別進樣，記錄色譜圖。分別計算加替沙星每個對映體峰麵積的RSD，結果均小於1%，說明本方法精密度和重複性良好。
取對照品溶液倍比稀釋，按“2.1”中色譜條件測定，以信噪比滿足3∶1和10∶1計算檢出限和定量限。結果本方法加替沙星單個對映體的檢出限和定量限分別為1.5和5μg·mL-1。
取供試品溶液按“2.1”中色譜條件測定，記錄色譜圖。結果供試品中對映體1和對映體2峰麵積比值平均為48.3∶51.7，與對照品溶液對映體峰麵積比接近，表明供試品溶液中兩對映體含量近似一致。
本研究使用手性色譜柱ChiralCD-Ph成功拆分了加替沙星對映體，以0.5mol·L-1NaClO4溶液（pH值4.0）-甲醇（53∶47）為流動相時，加替沙星兩個對映異構體分離度最佳，解決了手性流動相方法無法拆分加替沙星的難題。該方法樣品前處理簡單，精密度和重複性良好、靈敏度高，可用於加替沙星光學純度的測定和質量控製。
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