魚腥草芩藍合劑為常見中藥製劑，高效由魚腥草、液相黃芩、色谱时测板藍根、法同連翹、定鱼金銀花5味中藥材配製而成，腥草具有清熱解毒的芩蓝作用，臨床常用於治療外感風熱引起的合剂咽喉腫痛，急性咽炎、中种扁桃體炎等疾病。成分現代藥理研究表明，高效該製劑具有良好的液相解熱作用，臨床治療小兒皰疹性咽峽炎有較好的色谱时测療效。魚腥草芩藍合劑收錄於國家藥品監督管理局國家中成藥標準中，法同然而現行標準中隻有魚腥草、定鱼黃芩、連翹和金銀花的薄層色譜鑒別項和黃芩苷含量的測定項，不能全麵地反映複方製劑的內在質量。目前有關該製劑組分含量的測定研究較少，鄧茂芳等建立了高效液相色譜（HPLC）法同時測定魚腥草芩藍合劑中綠原酸、黃芩苷和黃芩素含量的方法。魚腥草芩藍口服液是同方配製的獸藥製劑，陸安等以魚腥草芩藍口服液為研究對象，建立了HPLC指紋圖譜鑒別方法，但未進行含量測定研究；邢玉娟等建立了HPLC法測定魚腥草芩藍口服液中黃芩苷和綠原酸含量的方法。魚腥草中含有綠原酸、槲皮素、槲皮苷等化學成分；黃芩中含有黃芩苷、漢黃芩素和漢黃芩苷等成分；連翹中含有綠原酸、槲皮素、槲皮苷、連翹酯苷A等成分；金銀花中含有綠原酸、槲皮素和槲皮苷等成分。筆者在前人研究的基礎上，對試驗條件進行優化，建立了HPLC法同時測定魚腥草芩藍合劑中綠原酸、連翹酯苷A、黃芩苷、槲皮苷、漢黃芩苷、槲皮素和漢黃芩素7種成分含量的方法，為全麵控製該製劑的質量提供參考。
高效液相色譜儀：UltimateU3000型，配有Chromeleon7.2SR5色譜工作站、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測器，賽默飛世爾科技（中國）有限公司。電子天平：XPE205型，感量為0.01mg，瑞士梅特勒–托利多公司。超聲波提取器：ELMASONICP型，德國艾爾瑪公司。純水儀：MilliPAKadvantageA10型，美國密理博公司。複方魚腥草合劑樣品：某生產企業樣品。綠原酸、連翹酯苷A、黃芩苷、槲皮苷、漢黃芩苷、槲皮素、漢黃芩素對照品：批號分別為18071907、A19011704、18041002、19091104、18032111、19082203、18030509，純度（質量分數）分別為96.1%、97.2%、93.3%、100.0%、98.5%、98.8%、99.1%，成都普菲德生物技術有限公司。乙腈、甲醇：均為色譜純，美國賽默飛世爾公司。磷酸，分析純，國藥集團化學試劑（北京）有限公司。實驗用水為超純水。
對照品單標儲備液：分別精密稱取綠原酸、連翹酯苷A、黃芩苷、槲皮苷、漢黃芩苷、槲皮素和漢黃芩素對照品各約10mg，其中黃芩苷置於10mL容量瓶中，其它6種化合物分別置於100mL容量瓶中，各加入50%甲醇溶液溶解，稀釋，定容至標線，配製成綠原酸、連翹酯苷A、黃芩苷、槲皮苷、漢黃芩苷、槲皮素和漢黃芩素的質量濃度分別為98.5、102.4、994、97.8、101.2、98.8、103.2μg/mL的單標儲備液。
混合對照品溶液：分別精密量取上述對照品單標儲備液各1mL，置於同一隻10mL容量瓶中，加入50%甲醇溶液稀釋並定容至標線，搖勻，配製成綠原酸、連翹酯苷A、黃芩苷、槲皮苷、漢黃芩苷、槲皮素、漢黃芩素的質量濃度分別為9.85、10.24、99.4、9.78、10.12、9.88、10.32μg/mL的混合對照品溶液。
精密量取魚腥草芩藍合劑2mL，置於20mL棕色容量瓶中，加入50%甲醇溶液12mL，超聲20min，冷卻至室溫，用50%甲醇溶液稀釋至標線，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液，待測。
色譜柱：SymmetryShieldRP18柱(4.6mm×250mm，5μm，美國沃特世公司)；流動相：乙腈–0.1%甲酸溶液；洗脫方式：梯度洗脫；洗脫程序：初始乙腈體積分數為20%，0～30min，乙腈由20%逐漸增加至40%，保持30min，60～80min，乙腈由40%逐漸增加至80%；流量：1.0mL/min；檢測波長：210nm；柱溫：30℃；進樣體積：5μL。
所測7種化合物中，綠原酸為咖啡酰奎寧酸類，紫外光譜最大吸收峰為327nm；連翹酯苷A為苯乙醇苷類，最大吸收為330nm；其餘成分為黃酮或黃酮苷類，黃芩苷最大吸收波長為278nm，槲皮苷為254nm和350nm，漢黃芩苷為276nm，槲皮素為370nm，漢黃芩素為276nm。各成分之間紫外最大吸收波長差別較大，但在210nm處均有較強的紫外吸收，故選擇210nm作為檢測波長同時檢測7種成分。
分別選擇乙腈–水溶液、乙腈–0.1%甲酸溶液和乙腈–0.1%磷酸溶液作為流動相，考察不同流動相體係對7種待測成分的分離效果。結果表明，乙腈–0.1%磷酸溶液作為流動相時，色譜峰形較好，故選擇乙腈–0.1%磷酸溶液為流動相。由於7種待測化合物極性跨度較大，采用等度洗脫無法對所有化合物進行分離，故采用梯度洗脫方式。對梯度洗脫程序進行優化，最終確定洗脫程序：初始乙腈體積分數為20%，0～30min，乙腈由20%逐漸增加至40%，保持30min，60～80min，乙腈由40%逐漸增加至80%。在此洗脫程序下，7種化合物在80min內獲得較好的分離，峰形較好。
分別對SymmetryShieldRP18柱(4.6mm×250mm，5μm)、AgilentZORBAXEclipseXDB柱（250×4.6mm，5μm）和ODSHHPERSIL柱(4.6mm×250mm，5μm)3種型號的色譜柱進行考察，結果發現，SymmetryShieldRP18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱分離效果最佳，故選擇該色譜柱進行方法學考察和樣品測定。
樣品為口服液體製劑，溶解性較好，但個別化合物濃度較高，故采用50%甲醇對樣品製劑稀釋10倍，過濾後直接進樣測定。混合對照品溶液和樣品溶液色譜圖如圖1所示。
相關鏈接：綠原酸，連翹酯苷A，漢黃芩苷，槲皮素
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