高效液相色譜以其靈敏、高效快捷、液相可分離大多數液體樣品等優點，色谱沙参廣泛應用於中藥有效成分含量測定、法测組分分析、定北指紋圖譜等方麵。中的蔗糖指纹紫外檢測器（UV）具有高靈敏度和穩定性，图谱因此高效液相色譜中應用較為廣泛，高效但是液相對於沒有紫外吸收或紫外末端吸收的有機化合物，其無法檢測。色谱沙参蒸發光散射檢測器（ELSD）彌補了上述紫外檢測器的法测不足，顯示出極大的定北優越性。2020年版《中國藥典》已經在黃芪、中的蔗糖指纹四季青、图谱酸棗仁、高效山銀花等20種中藥材的含量測定項目中使用蒸發光散射檢測器。
北沙參是傘形科植物珊瑚菜（GlehnialittoralisFr.SchmidtexMiq.）的幹燥根，為常用中藥，可緩解口燥咽幹、肺熱咳嗽等病症，其主要化學成分為糖類、香豆素類、磷脂、生物堿、氨基酸、揮發油、微量元素等。有研究表明，北沙參中的糖類成分含量最高，具有較好的抗腫瘤、抗氧化以及免疫調節活性。因此對北沙參中糖類成分進行測定，可以有效評價北沙參的質量，保證臨床用藥有效性。中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，可從整體上鑒別評價中藥材及中藥製劑半成品質量的真實性、優良性、穩定性。成分測定與指紋圖譜聯合使用，可以全麵評價中藥的質量。
目前法定標準中沒有北沙參的含量測定和指紋圖譜檢測項目，為了增強標準的可控性，筆者建立了北沙參的指紋圖譜測定方法和蔗糖的含量測定方法，以期為製訂北沙參質量標準奠定基礎。
高效液相色譜儀：Waters2695型，附帶Waters2420型蒸發光散射檢測器和Empower色譜工作站，美國waters公司。精密電子天平：AGBP210S型，感量為0.00001mg，德國Sartorius公司。乙腈：色譜純，美國賽默飛世爾公司。實驗所用其餘試劑均為分析純。實驗用水為超純水。蔗糖對照品：50mg，編號為1507–200001，中國藥品生物製品檢定研究院。
北沙參藥材編號和來源見表1。
取蔗糖對照品10mg，精密稱定，加水定容至10mL的量瓶中，配製成1mg/mL的蔗糖對照品溶液，搖勻，用0.45µm微孔濾膜濾過，即得。
取北沙參樣品粉末（過0.42mm篩）4g，精密稱定，加40%乙醇240mL，超聲提取（功率250W，頻率53kHz）30min，濾過，取續濾液100mL，濃縮至10mL，0.45µm微孔濾膜濾過，即得。
譜柱：InnovalNH2色譜柱（250mm×4.6mm，5µm，北京艾傑爾科技有限公司）；流動相：乙腈-水（80∶20），等度洗脫；流量：1mL/min；柱溫：30℃；ELSD的漂移管溫度：60℃；噴霧器加熱級別：100%；氣體壓力：137.90kPa。
蒸發光散射檢測器的係統條件由噴霧器加熱級別、漂移管溫度、氣體壓力和增益4個條件組成，由於增益值僅影響信號放大的程度，對檢測結果沒有影響，所以本試驗以漂移管溫度A、噴霧器加熱級別B、氣體壓力C為3個考察因素，每個因素分別設有三個水平，通過正交試驗對檢測器條件進行優選，因素水平見表2。
精密吸取對照品溶液10µL，注入高效液相色譜儀進行檢測。以蔗糖的峰麵積作為評價指標，優選條件。結果見表3～表5。
由表5可知，A、C兩個因素P值均小於0.05，說明漂移管溫度、氣體壓力這兩個因素對蔗糖的測定均具有顯著性意義；B因素的P值大於0.05，說明噴霧器加熱級別對蔗糖的測定不具有顯著性意義。根據試驗結果進行直觀分析，A1B3C1為最佳選擇，即漂移管溫度為60℃，噴霧器加熱級別為100%，氣體壓力為137.90kPa。
氨基柱其固定相是以超純全多孔球形矽膠為基質，通過采用獨有的固定相鍵合技術，使用含有氨基丙基官能團的有機矽烷鍵合而成，能比矽膠柱更快達到平衡，對流動相的水含量沒有矽膠柱敏感。氨基柱可用於極性化合物的正相分析，弱陰離子交換以及含水的反相液相分析。氨基柱柱被廣泛應用於木糖、乳糖、葡萄糖等糖類的反相分析模式中。故本實驗選用氨基柱作為色譜柱。
實驗選用氨基柱作為色譜柱。分別吸取蔗糖對照品溶液和樣品溶液各10µL，注入高效液相色譜儀檢測，開啟ELSD采集信號，得到蔗糖對照品和樣品的蒸發光檢測色譜圖，見圖1、圖2。由圖1、圖2可知，對照品圖譜和樣品圖譜中，ELSD檢測到蔗糖峰在11.5min附近。
取蔗糖對照品溶液，分別進樣2.5、5、10、15、20、25µL，經ELSD檢測，以蔗糖進樣質量的自然對數值為橫坐標X，以蔗糖峰麵積的自然對數值為縱坐標Y，進行線性回歸計算得線性回歸方程為Y=1.1180X+11.86（r=0.9997），結果表明，蔗糖進樣質量在7.30～72.95µg範圍內線性關係良好。將蔗糖對照品溶液逐級稀釋，分別進樣分析，以3倍信噪比計算檢出限，計算得檢出限為0.02mg/mL。
相關鏈接：乙腈，蔗糖，木糖，氨基酸
聲明：本文所用圖片、文字來源《化學分析計量》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係
