多糖是新鲜性南10個以上的單糖單元以糖苷鍵連接組成的大分子，其廣泛參與細胞的和干黏附、免疫、制龙增殖和分化。眼果疫调近年來，肉多天然來源的糖免多糖因其具有的生物學活性，在藥理學和生物化學領域引起了廣泛關注陽。节活目前，分析已有香菇多糖、新鲜性靈芝多糖、和干黃芪多糖等幾種天然來源的制龙多糖被應用於臨床或臨床前研究。研究發現，眼果疫调黃芪多糖具有激活巨噬細胞、肉多調節TIB細胞和機體免疫的糖免功能。桑葚多糖可增加NK細胞活性，节活促進T/B淋巴細胞增殖，增強機體特異性和非特異性免疫。靈芝多糖可促進樹突狀細胞的成熟，在癌症免疫治療過程中誘導T細胞增殖。同時，多糖具有補益心脾、緩解神經疼痛和消除腫脹等功效。
龍眼是一種亞熱帶特色水果，除我國外，在南亞地區、美國和澳大利亞也有種植。目前我國龍眼種植麵積和產量均居世界首位。幹製龍眼(桂圓)是我國藥典收錄的一味中藥，具有補益心脾、緩解神經疼痛和消除腫脹的功效。現代藥理學研究表明，多糖是龍眼肉生物活性的主要物質基礎之一，報道顯示龍眼多糖具有抗腫瘤、抗氧化和免疫調節等生物活性。
由於龍眼產期集中，除鮮食外，其主要的加工方式為幹製。文獻顯示，幹燥過程可能會對多糖的結構和生物活性產生顯著影響。韓苗苗等對龍眼幹燥過程中其總多糖的活性變化進行了分析，發現熱風幹燥12～60h，其總多糖對DPPH、羥自南基清除能力和總抗氧化能力顯著提高：幹燥12～24h時.總多糖抑製SGC7901和HepG2腫瘤細胞的能力顯著增強。但是由於沒有分析單一多糖組分的活性變化，作者推測多糖的生物活性差異可能與美拉德反應關聯的多糖一蛋白質相互作用有關。基於以上研究背景，作者采用小鼠腸係膜淋巴結細胞和巨噬細胞模型，分析了分離純化獲得的新鮮和幹製龍眼果肉多糖的免疫調節活性，旨在為龍眼的精深加工提供理論依據。
龍眼(品種“儲良”)：購自廣州市天平架水果市場，65℃鼓風幹燥去皮、去核後的鮮龍眼至水分含量為11.4％，備用。小鼠巨噬細胞(RAW264.7)：中山大學中山醫學院提供；昆明小鼠(SPF級)：購白海南省藥物研究所；RPMI-1640培養基、FBS(胎牛血清)和DMEM培養基：購白賽默飛世爾科技(中國)有限公司；中性紅、MTT(噻唑藍)、LPS(脂多糖)：購自西格瑪奧德裏奇公司；D301-R大孔吸附樹脂：購自南開大學樹脂公司；小鼠TNF-OL試劑盒、IL-6試劑盒：購自美國R&D公司：DEAE-FF陰離子交換樹脂：購自美國通用公司。AlphaLDPlus型真空冷凍幹燥機：德國MARTINCHRIST公司產品：1200高效液相色譜儀(HPLC)：安捷倫科技(中國)有限公司產品；SW-CJ-IF型超淨工作台：蘇州淨化設備有限公司產品；SpectraMax190型全自動酶標儀：美穀分子儀器(上海)有限公司產品：311型二氧化碳培養箱：賽默飛世爾科技(中國)有限公司產品。
鮮龍眼多糖(LPX3)製備：新鮮龍眼去皮、去核，打漿，料液體積比為1:15，80℃水浴攪拌2h，200目紗布過濾。果渣複提2次。將合並的濾液濃縮至總糖質量分數為2％～4％。體積分數80％乙醇溶液醇沉24h，離心，少量蒸餾水複溶沉澱。加入D301-R大孔樹脂，在pH5.0、溫度48℃、料液體積比61:100、時間2h條件下脫色素和除蛋白質。100目紗布過濾，濃縮後透析48h，濃縮得粗龍眼多糖。將陰離子交換樹脂裝入1.6cm×30.0cm的層析柱中，蒸餾水衝洗幹淨後用pH9.0的Tris-HCl緩衝液平衡，上樣，流量為0.5mL/min。洗脫程序為：0.0mol/LNaCl洗脫30min，0.03mol/LNaCl洗脫120min，0.05mol/LNaCl洗脫60min。檢測洗脫峰，將0.05mol/LNaCl洗脫得到的組分濃縮，透析48h，濃縮得到粗龍眼多糖。得到的粗龍眼多糖采用安捷倫1200HPLC、TSKgel-G4000PWXL串聯TSKgel-G3000PWXL純化,以示差檢測器檢測並收集相應均一組分，濃縮，冷凍幹燥後得到LPX3。
幹龍眼多糖(LPG2)製備：體積分數80％的乙醇溶液浸泡幹龍眼肉48h，陰幹後打漿，80℃水浴浸提2h，料液體積比1:15，200目紗布過濾。果渣複提2次。提取純化過程同上所述。
小鼠推頸處死，移至超淨台內，取腸係膜淋巴結。剪碎過200目不鏽鋼篩網，PBS衝洗2次，收集細胞。常溫1000r/min離心5min收集細胞，用適量RPMI-1640完全培養基調整細胞濃度。37℃、體積分數5％CO2培養備用。
腸係膜淋巴結細胞增殖能力的測定參照文獻，簡述如下：細胞濃度調整至5×106個/mL，接種至96孔板。樣品組用不同質量濃度(6.25、25、200μL)的LPX3和LPG2孵育細胞。以等量RPMI-1640完全培養基為空白對照組，並設置6個平行。培養72h後加入MTT溶液(5.0mg/mL)20ILL，37℃孵育4h。加入三聯液100μL，37℃再次孵育4h。酶標儀測定490nm處吸光度。計算公式如下：
式中：I為細胞增殖分數，％；A1為不同質量濃度LPX3和LPG2組腸係膜淋巴結細胞加入MTT和三聯液處理後在490nm處吸光度；A2為空白對照組腸係膜淋巴結細胞加入MTT和三聯液處理後在490nm處吸光度。
巨噬細胞增殖能力的測定參照文獻方法執行，簡述如下：調整細胞濃度至2×105個/mL，接種至96孔板培養2.0h，吸去培養基。加入100μLDMEM完全培養基，37℃、體積分數5％CO2培養12h後吸去培養基。樣品組加入不同質量濃度(100、200、400μg/mL)LPX3和LPG2。空白對照組加入等量的DMEM完全培養基，每組6個平行。培養24h後加入MTT溶液(5.0mg/mL)20μL，37℃繼續孵育4.0h。吸去培養基，加入DMSO150μL。酶標儀振蕩10min後，測定490nm處吸光度。計算公式如下：
式中：I為細胞增殖分數，％；A3為不同質量濃度LPX3和LPG2組巨噬細胞加入MTT和三聯液處理後在490nm處吸光度：A4為空白對照組巨噬細胞加入MTT和三聯液處理後在490nm處吸光度。
巨噬細胞吞噬能力的測定參照文獻，簡述如下：調整細胞濃度至2×105個/mL，接種至96孔板培養2.0h後，吸去培養基。加入100μLDMEM完全培養基，37℃、體積分數5％CO2培養12h後吸去培養基。樣品組加入不同質量濃度(50、200、400μg/mL)的LPX3和LPG2。空白對照組加入等量的DMEM完全培養基，陽性對照組加入等量LPS(5μg/mL)，每組6個平行。37℃孵育24h，PBS清洗2次後加入100μL的質量分數0.1％中性紅溶液。37℃孵育1h後用PBS洗掉未吞噬的中性紅。加入200μL細胞裂解液(乙醇和冰乙酸體積比為1:1)，4℃靜置過夜，酶標儀測定540nm處吸光度。計算公式如下：
式中：S為吞噬分數，％；A5組為不同質量濃度LPX3和LPG2組巨噬細胞加入中性紅溶液處理後在540nm處吸光度；A6為對照組巨噬細胞加入中性紅溶液處理後在540nm處吸光度。
巨噬細胞N0、IL-6和TNF-α分泌量的測定參照文獻，簡述如下：調整細胞濃度至2×105個/mL，接種2.0h後，吸去培養基。加入100μLDMEM完全培養基，37℃、體積分數5％CO2培養12h，吸去培養基。樣品組加入200μL相應質量濃度的LPX3和LPG2。空白對照組加入等量的DMEM培養基，陽性對照組加人等量LPS(5μg/mL)，每組6個平行。37℃培養24h後，培養液5000r/min離心5min，上清液中IL-6和TNF-α的質量濃度用ELISA試劑盒檢測。NO測定組每孔加入50μL的NO熒光探針。37℃孵育30.0min後PBS清洗3次。熒光顯微鏡下觀察並測定熒光強度，根據標準曲線計算NO分泌量。
實驗結果均表示為平均數±標準差。組問顯著性分析采用SPSS22.0軟件，單因素分析法(ANOVA)，Duncan檢驗，置信度為P＜0.05。
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