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高效液相色谱法(九)

来源:时间:2025-04-22 02:59:11

待測農藥對紫外光吸收的高效特性取決於農藥的分子結構,當分子結構中存在共軛體係即生色團時就會對紫外光產生吸收,液相吸收的色谱本質是某一特定波長的光量子能量等於農藥分子外層電子從基態躍遷至激發態軌道的能量,滿足這一條件時才能產生吸收。高效摩爾吸光係數大的液相農藥測定起來通常較為靈敏。在選擇檢測波長時,色谱通常要選擇該農藥分子的高效最大吸收波長,有時也會綜合考慮流動相、液相雜質的色谱影響。不用最大吸收波長檢測通常會降低靈敏度,高效有時還會導致線性範圍變窄。液相

(2)結構:紫外檢測器由光源、色谱分光係統、高效測量池(體積2~14μL)和檢測係統4大部分組成。液相從光源和分光係統得到單色光。色谱單色光通過測量池時,一部分光被待測農藥分子吸收,剩餘的透射光到達檢測係統的光電倍增管,南它將光信號轉換為電信號,再經過電子電路放大,最後得到與待測農藥濃度呈正比的儀器輸出信號並記錄下來進行處理。

紫外檢測器按光路可分為單光路和雙光路兩種。單光路紫外檢測器由於缺少補償電路,穩定性差,現在很少使用。雙光路檢測器包括測量(樣品)光路和參比(多為空氣)光路兩部分構成。

紫外檢測器按波長來分,有固定波長(多為254nm)和可變波長兩類。由於化合物最大吸收波長不都是254nm,同定波長檢測器應用受到限製而被淘汰。

紫外檢測器的光源通常由氘燈和鎢燈組成。氘燈提供紫外光源,它發出的波長最低可達到165nm。常規氘燈的使用波長範圍為195~400nm;可見光源由鎢燈提供,波長範圍為400~850nm。在停泵全波長掃描時,氘燈與鎢燈之間有一個燈切換程序。紫外檢測器也有用氙燈單獨提供全波長190~700nm光源的檢測器,此光源燈價格較貴。

分光係統包括聚光鏡、狹縫機構和單色器。可變波長檢測器采用光柵作單色器。光柵單色器的優點是固定的狹縫寬度可以產生幾乎恒定的帶寬,色散均勻,呈線性,與波長無關。

(3)使用及注意事項:在農藥殘留分析過程中,在基線噪聲允許的情況下,盡可能地提高靈敏度。在多殘留分析時,為了使各組分都獲得最靈敏的檢測,有些紫外檢測器可以對波長編程控製。在日常分析工作結束後,要用甲醇乙腈徹底清洗色譜柱和檢測室,防止有些組分在檢測器測量池中沉積,造成流動相回路部分堵塞,從而影響檢測工作。在雙波長紫外檢測器上可檢測兩個通道的能量,如果兩者相差較大,說明測量池可能被堵塞和汙染,這時就需要拆卸下測量池進行清洗。當測量池中有氣泡時,吸光度值會不停地變化,這時可以用膠塞瞬問堵住流動相出口,產生一個壓力後鬆開即可將氣泡帶出。在實際分析工作中要嚴防檢測器出口堵塞,導致壓力過高而使石英測量池爆裂(一般應小於5MPa)。

2、二極管陣列檢測器

二極管陣列檢測器(diode array detector,DAD)為采用二極管換能的紫外檢測器,亦稱PDA。它的成功開發是高效液相色譜檢測技術的重大進展。1975年Talmi首次報道,1982年第一台商品二極管陣列檢測器問世。色散型紫外檢測器隻能測定某一波長下吸光度與時間關係曲線,即隻能得到二維圖譜。二極管陣列檢測器可以同時獲得吸光度、波長和時間的三維譜圖,可以做出任意時間下的吸光度一波長曲線,能反映一種農藥在所設置的紫外波段範圍整體吸收情況。

通過調整牽引點甚至可以看到負峰,二維(2D)和三維(3D)掃描可通過軟件快速切換。三維數據采集功能可以對單峰的純度進行檢驗,其原理是純物質的峰前部分、峰中部分、峰後部分的紫外吸收光譜應當一致,否則可以判定是假單峰。早期的二極管陣列檢測器靈敏度偏低,光譜分辨率遠低於色散型紫外檢測器。現在的高分辨率二極管陣列檢測器幾乎可以和色散型紫外檢測器相媲美。光電二極管數目也從35支上升到1024支,光學係統也有了質的飛躍。

二極管陣列檢測器的工作原理和結構:二極管陣列檢測器的主要特點是用光電二極管陣列同時接受來自測量池的全光譜透過光。為實現這一功能,它在光路結構上與色散型紫外檢測器有重要區別。光電二極管陣列檢測器是令光線先通過樣品測量池,然後由一係列分光技術,使所有波長的光在接收器上同時被檢測。

二極管陣列檢測器,氘燈光源連續發光,經過消色差透鏡係統聚焦在測量池內,然後透過光束經聚焦後通過入射狹縫進入多色儀。在多色儀中,透過光束在全息光柵的表麵色散,並投射在二極管陣列元件上。多色儀能操作其聚焦麵與接收器吻合,陣列上的各個元件同時收到不同波長的光波。

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