標準物質網-真菌毒素的原创課程講師圖" src="https://shijiaoke.oss-cn-beijing.aliyuncs.com/News/zhaoxiaocaokechnegjieshaotu20200429.png" style="width: 800px; height: 447px;" />

點擊觀看課程視頻

真菌毒素是真菌生長過程中產生的代謝物，汙染食品與農作物，食品素給人的菌毒检测身體健康帶來一定的危害，對農業生產具有巨大的原创危害性。了解常見的食品素真菌毒素的危害及其檢測方法，可以為進一步控製真菌毒素汙染提供參考價值。菌毒检测

一、原创真菌毒素的食品素概念

真菌：是一類有細胞壁，不含葉綠素，菌毒检测無根莖葉，原创以腐生或寄生方式生存，食品素能夠及進行有性或無性繁殖的菌毒检测微生物；

黴菌：是絲狀比較發達的小型真菌的俗稱；

真菌毒素：是由真菌產生的次級代謝產物。即由細胞增殖過程中形成的原创丙酮酸、酯酸、食品素氨基酸等初級代謝產物作為前提物質，菌毒检测進行生物合成的物質。一般分為黴菌毒素和蘑菇毒素。

二、真菌毒素的種類

已知有200多種不同的真菌毒素，一般同時具有毒性強和汙染頻率高的特點。其中包括：黃曲黴毒素B1和M1 (Aflatoxins, FB1、FM1)；赭(棕)曲黴毒素A (Ochratoxin A, 0A) 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素) (Deoxynivalenol, DON)； 玉米赤黴烯酮(Zearalenone, ZEN(F-2)) ； T-2毒素(T -2 toxin,T-2)； 伏馬黴素； 展青黴素(棒曲黴毒素) (Patulin, PTL)；雜色(柄)曲黴毒素(terigmatocystin)； 串珠鐮刀菌素(Moniliformin, MF)三硝基丙酸； 二乙酰鑣草鐮刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol DAS)、麥角堿、黃米毒素、島青黴毒素、橘青黴素、皺褶青黴素、黃綠青黴素、紅矢精、黃綠素、圓弧青黴偶氮酸和F- 2毒素等。

（1）真菌毒素之黃曲黴毒素

黃曲黴毒素(Aflatoxins。簡寫AFT)是黃曲黴、寄生曲黴及溫特曲黴等產毒菌株的代謝產物，是群結構類似的化合物。目前已發現17種黃曲黴毒素。根據其在波長為365nm紫外光下呈現不同顏色的熒光而分為B、G二大類:

B大類在氧化鋁薄層板上於紫外光照射下呈現藍色熒光；

G大類則呈綠色熒光。

（2）真菌毒素之赭曲黴素

毒性：主要對腎產生危害，造成腎腫大，當濃度超過5mg/Kg時，對肝髒組織和腸道產生破壞，引起腸炎等。無色結晶化合物，易溶於極性溶劑和稀的碳酸氫鈉水溶液中，微溶於水，在紫外光照射下，呈綠色熒光，該化合物穩定，在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不被破壞，但在穀物中隨時間延長而降解。

存在於：糧穀物、大豆、葡萄及葡萄酒、咖啡、可可和巧克力、中草藥、調味料、啤酒等。

檢測方法：薄層層析法、液相色譜法。

（3）真菌毒素之玉米赤黴烯酮

玉米赤黴烯酮也稱F-2毒素。鐮刀菌屬的多個菌種如禾穀鐮刀菌、三線鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、半裸鐮刀菌、木賊鐮刀菌、黃色鐮刀茵、茄病鐮刀菌、串珠鐮刀菌等都可以產生該毒素。這些菌廣泛存在於土壤、空氣及汙染的穀物中，主要汙染玉米，也汙染大麥、小麥、燕麥等。玉米的陽性檢出率可達45%，最高含毒量可達2909 mg/蠅，小麥的陽性檢出率可達20%，含毒量為0.36~11.05 mg/k。

檢測方法：高效液相色譜法。

（4）真菌毒素之伏馬菌素

自然界中最為普遍，毒性強，損傷肝腎功能白色粉末，易溶於水、甲醇、乙腈等溶劑，在甲醇溶液中不穩定，在乙腈水溶液中非常穩定。

檢測方法：高效液相色譜法。

（5）真菌毒素之展青黴素

展青黴毒素是多種真菌的有毒代謝產物，該物質方麵是一種廣譜的抗生素，另一方麵對小鼠、兔子等試驗動物具有較強的毒性。其汙染食品和飼料後產生的毒性遠大於其抗菌作用。

（6）真菌毒素之雜色曲黴毒素

毒性：引起腫瘤

汙染：小麥、大麥、玉米、花生、大豆、咖啡豆、火腿、奶酪等。易溶於氯仿、苯、吡啶、乙腈，微溶於甲醇、乙醇，不溶於水和堿性溶液。在紫外線照射下，呈磚紅色熒光。

檢測方法：薄層法，紫外分光光度計測定。

三、真菌毒素的檢測

（一）前處理

1. 采樣和樣品的準備

（1）根據分析目的的不同確定采樣地點，如：農田、倉庫、加工廠、運輸工具、零售商和醫院等。

（2）采樣方法：

靜態樣品：麻袋、箱櫃和車廂等容器存放分樣品均屬靜態樣品。

采樣工具：頂端尖銳的長柄采樣釺子。

采樣數量：小批量時采1/4；大批量時為整批麻袋數。

動態樣品：用商品化的十字交叉切分自動采樣器。

（3）采樣量采大樣，按四分法對角連續多次分樣縮減至1 - 2kg，最後取代表樣全部粉碎。美國農業部USDA的方法：成批樣每批取3份大樣，每份22kg。實驗室分析用的樣品為1- 5kg。

2.提取

（1）提取溶劑

溶劑的選擇取決於待測毒素的種類、毒素性質、毒素在提取溶劑中的溶解度、提取溶劑的毒性價格、非測定成分在提取溶劑中的分配係數等。毒性小、極性大、價格低廉的溶劑係統。

常用溶劑：甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙睛和水中一種或多種不同配比的混合物。

（2）提取溫度

溫度影響毒素的回收率，適當升高溫度可以增加毒素的回收率。

（3）食品基質

固體食品：選用浸劑、洗脫、索氏回流等方法。

液體食品：液-液分配方法

3.純化

純化：在確保不損失待測毒素的前提下除去幹擾雜質的過程稱為純化。

常用淨化方法：液-固萃取、液-液分配、化學吸附、色譜法、透析法以及SFE法等。使用最廣泛的是色譜法。

色譜法：薄層色譜法(柱色譜法最常用)

吸附色譜柱常用的吸附劑：矽膠、礬土、氧化鋁、活性炭、弗羅裏矽土。

分配色譜柱常用的填充劑：矽藻土、纖維素。

固相提取 (廣泛采用) ；免疫親和柱IAC (應用於農產品的新技術)。

（二）真菌毒素的檢測方法

1.薄層色譜測定法

實驗原理：樣品經提取、淨化、薄層分離後，某些真菌毒素在紫外光下，產生特定熒光，以標準品做參比，根據其在薄層上顯示的熒光的最低檢出量來定量。

適用範圍：適合於本身能夠產生熒光的真菌毒素。如：AFB、OTA

優點：經濟、對設備和檢驗人員要求不高。

2.高效液相色譜法

實驗原理：樣品中的真菌毒素經柱層析分離後，通過測量色譜峰的麵積定量。

優點：特異性強、靈敏度高、定量準確。

分析時應該考慮流動相、色譜柱、柱溫和檢測器等分析條件，找出最佳配比。

有熒光的用熒光檢測器，B類單端孢黴烯族化合物本身不產生熒光，但C6位置上有酮基，可配紫外檢測器檢測。

應用：選擇高效液相-熒光分光光度法是定量測定農產品中玉米赤黴烯酮汙染最可靠、亦是最常用的方法。

3.免疫親和柱-熒光計快速檢測法

實驗原理：利用抗原一抗體免疫反應的原理，使用大劑量的單克隆抗體，選擇性的將樣品提取液中的黃曲黴毒素吸附，用水將雜質洗脫除去，再用甲醇定量將黃曲黴毒素洗脫，達到分離淨化目的。

免疫反應：指抗原和抗體分子的結合。抗原抗體複合物的形成要求二者結構有互補性，抗原與抗體的結合液因此具有高度特異性。

優點：高度特異性、高靈敏度、快速簡便等。

4.快速檢測卡檢測法

檢測原理：測定基礎是抗原抗體反應，抗體連接在柱體內，樣品經過提取、過濾後，緩慢的通過赭曲黴毒素的免疫親和柱，在免疫親和柱內毒素與抗體結合，之後洗滌免疫親和柱，除去沒有被結合的其他無關物質。用甲醇洗脫赭曲黴毒素A，然後再注入到分析儀器中用於檢測。