2.2.2 蛋白質二級結構預測與分析

通過在線PredictProtein軟件對AT基因不同拷貝編碼的甘蓝功蛋白質進行亞細胞定位發現2個蛋白均定位在細胞質；TMHMM跨膜螺旋區分析表明,2個蛋白均為膜外蛋白，無跨膜結構。型油酰转SOPMA結構預測表明,菜乙AT蛋白中，無規則卷曲占比最高,移酶验证均在43%左右,其次為x-螺旋,約占35%，延伸鏈約占18%,基因β-轉角約占4%，兩蛋白有一定差異(表4)。隆及

2.2.3 蛋白質三級結構預測與分析

經SWISS-MODEL同源建模發現,甘蓝功114、148均適應酰基轉移酶模型,型油酰转但其構象略不同(圖1,2）。

2.3 過表達與RNAi幹擾重組質粒圖譜

AT基因的菜乙2個拷貝114與148過表達重組質粒見圖3-A。AT基因的移酶验证2個拷貝114與148RNAi重組質粒見圖3-B。

2.4 轉基因擬南芥檢測

經潮黴素篩選T0轉基因擬南芥種子後(圖4),基因對T1進行pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、隆及pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148載體潮黴素鑒定,甘蓝功結果表明(圖5),目的質粒T-DNA均已插入擬南芥基因組,表明擬南芥轉基因成功。

由表5可知,型油酰转與野生型擬南芥種子脂肪酸各成分相比,幹擾114基因(114R)表達會導致硬脂酸和油酸含量極顯著的增加,增加幅度分別為10.25%,38.33%,而軟脂酸和亞麻酸是極顯著的減少,減少幅度分別為10.57%,17.90%,顯著減少亞油酸的含量,花生烯酸的含量也有減少,但是差異不顯著；過表達114基因(35s-114)會導致軟脂酸、油酸和亞油酸含量的菜乙顯著增加,增加幅度分別達到15.52%,37.88%,12.33%,而硬脂酸、亞麻酸和花生烯酸含萬方數據量達到極顯著的減少,幅度分別為50.22%,10.86%,29.93%。

在對飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸分析中,幹擾114基因會使飽和脂肪酸含量下降,對不飽和脂肪酸無顯著影響；過表達114基因會增加不飽和脂肪酸的含量,而對飽和脂肪酸無顯著影響。

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