（4）裝液量對菌株MCDA02發酵產CDA的海洋影響裝液量對菌株MCDA02生長的影響如圖10，裝液量低於20％時，细菌酰酶隨著裝液量的丁质增加，菌株的脱乙条件產酶量逐漸升高，當裝液量達到20％時，发酵產酶量達到最高。优化裝液量繼續增大，海洋菌株MCDA02的细菌酰酶產酶量降低。
 

（5）接種量對菌株MCDA02發酵產CDA的丁质影響接種量對菌株MCDA02生長的影響如圖11，接種量在0.5％～4％之間時菌株都能比較好地產酶，脱乙条件相對酶活達到70％以上。发酵接種量為1％時，优化菌株相對酶活最高。海洋
 

（5）響應麵優化發酵條件實驗設計

從單因素中選取碳源、细菌酰酶無機鹽和發酵培養基初始pH三個因素為因變量，丁质運用DesignofExperiments進行三因素三水平響應麵實驗設計，共計17個試驗點的Box-Behnken響應麵分析試驗(表2)。實驗設計與響應值結果，如表3。

運用DesignofExperiments進行方差分析和回歸分析(表3)，擬合得到回歸方程如下：

Y=-52.244+8.9515*A+279.125*B+10.807*C-30.5*A*B-0.64*A*C-2l*B*C-1.107*A2-817.5*B2-0.577*C2

由表4可知：模型P＜0.01，表明該方程模型極顯著，不同處理間的差異性極顯著；失擬項P＞0.05，表明模型失擬項不顯著l從F值的大小可以得到，一次項中各因素對幾丁質脫乙酰酶酶活的影響順序是C＞A＞B，交互相對酶活影響的主次順序為AC＞AB＞BC。模型的R2為0.9512，說明該模型能解釋95.12％響應值的變化，因而該模型擬合程度良好，試驗誤差小，可以用於預測最優發酵條件參數。結果表明，最佳發酵條件為：木薯澱粉1.09％、ZnS0₄0.05％、pH7.86，預期酶活2.01U／mL。結合實際，我們將發酵條件調整為木薯澱粉1.1％、ZnSO₄0.05％、pH7.9。經過後期驗證測得酶活2.06U／mL。與預期基本符合。比優化之前提高了1.41倍。優化後菌株MCDA02發酵產CDA水平為2.06U／mL，低於部分報道的細菌發酵幾丁質脫乙酰酶的發酵水平。

三、結論

從高公島采集的海泥中，篩選獲得了3株產幾丁質脫乙酰酶菌株，菌株MCDA02發酵產酶水平最高。通過形態學特征、生理生化特性及16SrDNA分析將菌株MCDA02鑒定為Microbacteriumesteraromaticum。優化獲得了菌株MCDA02的最佳發酵條件，優化後酶活為2.01U／mL，較優化前酶活1.43U／mL，提高了1.41倍。

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