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HPLC法对不同来源北苍术中苍术素的含量测定

来源:时间:2025-04-22 02:35:08

目的法对采用HPLC法測定不同產地和不同生長年份北蒼術[Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.]中蒼術素的含量。方法收集不同來源的不同北蒼術樣品,以甲醇為溶劑,源北采用超聲提取法提取,苍术采用HPLC法測定蒼術素的中苍含量,選用DiamonsilC18(250mm×4.6mm,术素5μL)色譜柱,含定流動相為甲醇-水(79∶21),量测檢測波長為340nm,法对流速1mL/min,不同柱溫25℃,源北進樣量20μL。苍术結果蒼術素的中苍線性範圍為0.1875~0.6000mg/mL,方法精密度、术素重複性、含定穩定性良好;加樣回收率為95.4%。不同產地北蒼術中蒼術素的含量為0.3232%~0.5959%,阿榮旗產北蒼術飲片中蒼術素含量最高。3年生、4年生、5年生蒼術中蒼術素的含量分別為:(0.3500±0.0048)%、(0.4550±0.0030)%、(0.3350±0.0118)%。結論本方法簡便、快速、準確,適用於北蒼術中蒼術素的含量測定。

2015年版《中國藥典》規定,蒼術的來源有2種,分別是茅蒼術(Atractylodeslancea(Thunb.)DC)和北蒼術(Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.)。茅蒼術主要產於江蘇、湖北、河南等省;北蒼術主要產自內蒙古自治區、山西、黑龍江、吉林等省。研究表明蒼術的主要化學成分為聚乙烯炔和倍半萜類化合物,具有抗癌、抑菌、抗病毒等藥理作用,臨床上常用於病毒性疾病的治療。北蒼術的原植物分布區域廣泛,各地生境不盡相同,影響蒼術中藥材的質量。本研究建立了HPLC法,測定不同來源北蒼術中蒼術素的含量,現報道如下。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters2695型液相色譜儀(沃特世科技有限公司),MDF-492型超低溫冰箱(日本三洋公司),DFT200C型高速多功能粉碎機(永康市敏業工貿有限公司),CPX3800H-C型超聲波清洗機(日本BRAN-SONIC公司),DHG-9240A型恒溫鼓風幹燥箱(常州市國旺儀器製造有限公司),PALL水純化係統(美國PallCorporation公司),ML203T/02型十萬級電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司),MDF-492型超低溫冰箱(日本三洋公司)。

1.2試劑

甲醇(色譜純,德國默克公司,批號:603-001-00-x),95%乙醇(天津福晨化學試劑廠,批號:20171110),石油醚(沸程60~90℃,天津福晨化學試劑廠,批號:20171201),蒼術素標準品(中國食品藥品檢定研究院,批號:111924-201806)。

1.3藥材

市售飲片的產地分別源於內蒙古自治區阿榮旗、赤峰、莫力達瓦達斡爾族自治旗(簡稱“莫旗”)、紮蘭屯;3年生、4年生、5年生栽培北蒼術根莖均采自於蒙古自治區莫力達瓦旗多熱博熱其勒村(簡稱“多熱”),依次標記為1~7號。經齊齊哈爾醫學院藥學院王曉麗副教授鑒定為北蒼術[Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.]的根莖。

2方法與結果

2.1溶液製備方法

2.1.1對照品溶液

稱取蒼術素標準品適量,甲醇溶解,超聲10min,製得20μg/mL的溶液,經0.45μm的微孔濾膜濾過,備用。

2.1.2供試品溶液

取“1.3”項下不同來源的北蒼術飲片,粉碎後過三號篩,分別稱取0.2g,置於具塞錐形瓶中,加入甲醇50mL,用封口膜密封後,稱定重量,超聲提取(功率250W,頻率40KHz)1h,冷卻至室溫後,稱定重量,用甲醇補足缺失的重量,用0.45μm過濾膜過濾,取續濾液,備用。

2.2色譜條件

DiamonsilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μL),流動相甲醇-水(79∶21)等度洗脫,流速1.0mL/min,檢測波長340nm,進樣量20μL。

2.3方法學考察

2.3.1線性關係考察

精密稱取對照品60mg,甲醇定容至10mL,混勻,移取1mL至10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,標記為1號。從1號中吸取5mL溶液,用甲醇定容至刻度,標記為2號。以此類推,得3、4、5、6號溶液。按“2.1”項色譜條件下進行測定。以峰麵積為縱坐標(Y),對照品濃度為橫坐標(X)進行線性回歸,得回歸方程為Y=2715.1X-9.6694(r=0.9998),對照品濃度在0.01875~0.6000mg/mL範圍內線性關係良好。

2.3.2精密度試驗

吸取“2.1.2”項下供試品溶液20μL,按“2.2”項色譜條件,連續進樣6次,測定峰麵積,經計算RSD為0.49%,表明儀器精密度良好。

2.3.3重複性試驗

吸取“2.1.1”項下對照溶液20μL,按“2.2”項下色譜條件,連續進樣6次,測定蒼術素峰麵積,經計算RSD為1.79%,表明方法重複性良好。

2.3.4穩定性試驗

吸取“2.1.1”項下供試品溶液20μL,按“2.2”項下色譜條件,分別在0、2、4、6、8、10h時進樣,測定蒼術素峰麵積RSD為1.74%,表明供試品溶液在10h內穩定性良好。

2.3.5加樣回收率試驗

稱取4號粉末0.1000g,共6份,分別加入“2.1.1”項下對照溶液5mL,置於50mL錐形瓶中,用甲醇定容至刻度,超聲提取1h後過0.45μm微孔濾膜,取續濾液,按“2.2”項下色譜條件測定,計算回收率為95.4%,見表1。


2.4樣品含量測定

分別稱取1~7號蒼術樣品0.2g,每份藥材製備3份平行樣,按“2.1.2”項下方法製備供試品溶液,按“22..22”項色譜條件測定,結果不同產地的蒼術中蒼術素的含量為0.3200%~0.5599%,阿榮旗飲片中蒼術素含量最高。3年生、4年生、5年生蒼術中蒼術素的含量分別為:(0.3500±0.0048)%、(0.4550±0.0030)%、(0.3350±0.0118)%,見表2。
3討論

含量測定結果顯示,4年生人工栽培北蒼術的蒼術素比3年生和5年生的含量高,以指標成分的含量為依據,本實驗結果表明北蒼術的最佳栽培時間為4年,與市售飲片相比,內蒙古莫旗的人工仿野生種植蒼術中蒼術素的含量符合標準。蒼術中揮發性成分是主要活性成分,為特殊的次生代謝產物,其含量受遺傳、個體發育和環境變化的影響。內蒙古自治區為溫帶大陸性氣候,阿榮旗、莫旗、紮蘭屯及多熱地處內蒙古東部,位於大興安嶺東麓中段,氣候呈現出春溫、夏升、秋降、冬寒的特點,劇烈的溫差有利於區域內北蒼術體內物質積累。本方法簡便、快速、準確,適用於北蒼術中蒼術素的含量測定。

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