雙酚A易溶於甲醇、乙醇、液相荧光液透丙酮、色谱苯等有機溶劑，法测酚難溶於水。定血樣品於37℃循環浸提，析器甲醇、中双丙酮的溶出沸點低於乙醇、苯（毒性較大），高效有利於樣品浸提液濃縮處理；丙酮沸點雖較甲醇低，液相荧光液透但樣品不耐受丙酮。色谱因此選擇甲醇作為替代溶劑模擬臨床使用對雙酚A進行加嚴浸提。法测酚
采用高效液相色譜熒光法對雙酚A標準溶液的激發波長（210～300nm）及發射波長（280～400nm）進行光譜掃描。結果表明，析器雙酚A的中双最佳激發波長和發射波長分別為232、314nm。
取血液透析器端蓋及外殼部分剪成小塊樣品，以甲醇為浸提溶劑，按照1g樣品-10mL甲醇的比例浸提，分別采用超聲和振蕩兩種方式浸提。采用甲醇對樣品進行10、20、30min超聲浸提，分別超聲浸提3次，試驗結果表明三次超聲浸提均未達到極限浸提。另將樣品於控製型控溫搖床振蕩（37℃，200r/min）浸提5、24h，測得浸提液中雙酚A的濃度分別為8.58、27.58ng/mL，說明雙酚A的溶出量隨浸提時間的增加而增加。
通過上述試驗表明超聲浸提及振蕩浸提時樣品中雙酚A均不能達到極限浸提，無法準確測定樣品中雙酚A的殘留量，故采用模擬臨床使用的方式進行樣品預處理。
分別取空白供試液、雙酚A對照品溶液及樣品供試液，按照1.3色譜條件進行測定。試驗結果表明，雙酚A對照品的保留時間約為21.5min，樣品供試液中雙酚A的保留時間與雙酚A對照品的保留時間基本一致。雙酚A的色譜峰峰形良好且與鄰近色譜峰分離度均大於1.5，空白供試液及樣品供試液對本實驗分析均無幹擾，滿足試驗要求，方法專屬性良好。雙酚A對照品溶液色譜圖見圖3
按照1.3色譜條件測定1.2配製的雙酚A係列標準工作溶液，以雙酚A的質量濃度（x，ng/mL）為橫坐標，以色譜峰麵積（y）為縱坐標，繪製標準工作曲線。計算得到雙酚A在質量濃度為51.2～1024ng/mL範圍內與色譜峰麵積線性關係良好，線性回歸方程為y=0.0652x-0.7942，線性相關係數為0.9999。
用甲醇稀釋1.2配製的雙酚A標準儲備液並進行測定，以3倍的信噪比（S/N）計算檢出限，10倍的S/N計算定量限，得到該方法下雙酚A的檢出限與定量限分別為10.8、51.2ng/mL。
在樣品浸提液基質中分別添加低、中、高濃度的雙酚A標準溶液，精密量取樣品加標浸提液100mL旋蒸至幹，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，渦旋至殘渣完全溶解，用0.45μm濾膜過濾，得樣品加標供試液。3個加標水平分別為51.50、103.0、206.0ng/mL，每個加標水平平行測定6次，結果見表2。由表2可知，雙酚A在3個濃度水平的平均加標回收率為90.23%～104.21%，相對標準偏差為0.8318%～3.661%，表明該方法的準確度及精密度良好，均符合《中國藥典》2020版9101分析方法驗證指導原則中的指標要求。
采用本方法對血液透析器平行測定三組，將測定結果代入式(1)，計算其臨床接觸量，結果見表3。
式中：W—每套樣品中雙酚A臨床接觸量，μg；
c—樣品供試液中雙酚A質量濃度，ng/mL。
由表3結果可知，每套血液透析產品中雙酚A的最大臨床接觸量為1.386μg。根據GB/T16886.17—2005《醫療器械生物學評價 第17部分：可瀝濾物允許限量的建立》對血液透析器中雙酚A允許限量進行評估，本方法對血液透析器中雙酚A的測定值在允許限量範圍內。
建立了血液透析器中雙酚A的浸提方法，采用高效液相色譜熒光法測定血液透析器中雙酚A的溶出量。該方法專屬性強、靈敏度高、精密度及準確度好，可用於血液透析器安全性風險評估，為監管部門提供技術支持。
聲明：本文所用圖片、文字來源《化學分析計量》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯係
相關鏈接：雙酚A，甲醇，丙酮，苯
