雲南鬆（Pinusyunnanensis）係鬆科（Pinaceae）鬆屬（Pinus）植物，云南用主要分布於我國四川、松针雲南、精油究廣西等地區。取及作為鬆屬植物重要的抗氧林產品之一，鬆針精油近年來受到廣泛關注和研究。化活其揮發油中主要含有α-蒎烯、性研β-蒎烯等萜烯類成分，云南用具有明顯的松针鎮咳和祛痰作用，並有抗真菌、精油究細菌和抗腫瘤活性。取及國內種植的抗氧雲南鬆、濕地鬆、化活油鬆、性研前紅鬆、云南用加勒比鬆、雲南鬆、華北落葉鬆等鬆樹種類的鬆針揮發油的成分研究已有報道，研究結果表明其組分及含量可因地域、樹種、生長環境、采收季節和提取方法的不同而有一定差異。雲南鬆科植物資源豐富，主要海拔多為600～2100m地區，本文開展雲南鬆針精油提取和抗氧化活性研究，探索共水法提取鬆針精油的最佳工藝，對於雲南鬆的綜合利用具有重要的意義。
材料：雲南鬆新鮮針葉，采於雲南省保山市隆陽區，經保山學院汪建雲教授鑒定係雲南鬆（Pinusyunnanensis）的針葉，清水洗淨，曬幹備用。
試劑：1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）：美國Sigma公司；2，2-聯氮-二（3-乙基-苯並噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）：合肥博美生物科技有限公司；過硫酸鉀、磷酸二氫鈉、鐵氰化鉀、三氯乙酸、硫酸亞鐵、三氯化鐵、水楊酸：天津市風船化學試劑科技有限公司；30％的H2O2、氯化亞鐵：天津市巴斯夫化工有限公司；結晶紫、草酸銨、抗壞血酸、氫氧化鈉：西隴科學股份有限公司。所有試劑均為分析純。
紫外可見分光光度計（UV2600）：日本島津；氣相色譜-四極杆質譜聯用儀（TRACEDSQ）：賽默飛世爾科技有限公司；HH-4數顯恒溫水浴鍋：常州國華電器有限公司；N-1001旋轉蒸發儀：東京理化；TDL-4低速台式離心機：上海安亭科學儀器廠；PE30酸度計：梅特勒-托利多。
稱取100g2～3mm小段的雲南鬆針葉（鮮葉），置於1000mL圓底燒瓶中，按料液比加入含有NaCl的蒸餾水，浸泡3h，再共水蒸餾，收集玻璃分水器中的上層精油，並用無水NaSO4幹燥，過濾，得無色透亮雲南鬆針精油，於4℃下保存，備用。出油率%=精油質量（g）/鮮雲南鬆針質量（g）×100%。
以出油率為指標，分別考察NaCl用量、料液比、提取時間和浸泡時間4個因素對鬆針精油出油率的影響。設定NaCl用量為6%，料液比為1:6g/mL，提取時間為3h，浸泡時間為2h，固定其它條件，分別考察NaCl用量（0%、2%、4%、6%、8%、10%），料液比（1:3、1:4、1:5、1:6、1:7g/mL），提取時間（1、2、3、4、5h），浸泡時間（0、1、2、3、4h）對出油率的影響。
依據單因素實驗結果，選擇NaCl用量（A）、料液比（B）、提取時間（C）和浸泡時間（D）四個因素進行L9（34）正交實驗，優化鬆針精油的提取工藝（見表1）。
采用GC-MS對雲南鬆針精油進行成分分析。氣相色譜條件為：色譜柱：型號DB-17，規格30m×0.25mm×0.25μm；載氣為He，進樣口溫度：230℃；流量：1.0mL/min。升溫程序：起始50℃，保持4min；5℃/min升溫到70℃；20℃/min升溫到120℃；10℃/min升溫到170℃；5℃/min升溫到200℃；40℃/min升溫到280℃。質譜條件為離子源：EI，電離能70eV，離子源溫度：200℃。
鬆針精油折光指數的測定：GB/T14454.4-2008；旋光度的測定：GB/T14454.5-2008；相對密度的測定：GB/T14455.4-2008。
準確配製7.40mmol/L的ABTS和2.60mmol/L的過硫酸鉀試劑，按1:1體積比混合均勻，室溫下避光放置12～16h，得ABTS+自由基儲備液。在734nm處，用無水乙醇將ABTS+自由基儲備液稀釋至吸光度0.7±0.02，於4℃冰箱儲存備用。準確移取3.9mLABTS+自由基溶液，加入不同質量濃度（20.40、10.20、5.10、2.55、1.28、0.64mg/mL）的鬆針精油（無水乙醇作溶劑），混合均勻後在室溫下避光靜置3.5h，於734nm處測定吸光度AE，以維生素C為對參照。以相同體積的無水乙醇作對照，測定吸光度AB。ABTS+自由基的清除率為：ABTS+·清除率%=（AB-AE）×100%/AE。
準確配製25.60mg/L的DPPH溶液（無水乙醇作溶劑），準確移取3.90mL，加入0.1mL不同濃度（102.20、51.10、25.50、12.75、6.38、3.19mg/mL）的鬆針精油，混合均勻，室溫避光反應30min後，於波長517nm處測定吸光度Ai，無水乙醇作對照，測得吸光度Ac，同時測定3.90mL的無水乙醇中加入0.1mL不同濃度的鬆針精油混合液的吸光度Aj，並以維生素C為對照。
DPPH自由基的清除率為：DPPH·清除率%=
結晶紫法：在7支20mL比色管中分別加入0.3mL結晶紫（0.4mmol/L），1.2mLFeSO4溶液（1mmol/L）和0.6mLH2O2溶液（2.0mmol/L），混勻後用pH=4.0的緩衝溶液定容至10mL，搖勻，放置30min後，在580nm處測吸光度值Ab，同樣的方法測定不加H2O2時580nm處的吸光度A0。則羥自由基的產生量可以用ΔA=A0-Ab來表示。表觀抗羥自由基氧化率的測定方法：在加H2O2之前分別加入1mL不同濃度的鬆針精油（20.40、10.20、5.10、2.55、1.28、0.64mg/mL），測定其吸光度As，並以維生素C為對照，則表觀抗羥自由基氧化率S可以按下式計算：S=（As-Ab）×100%/（A0-Ab)。
水楊酸法：向比色管中加入2.0mL0.02mol/LFeSO4溶液、2.0mL1.0mmol/LH2O2溶液，震蕩均勻，於517nm處測得吸光度為A參比；再加入6.0mmol/L水楊酸3.0mL，搖勻後於37℃水浴15min，測定其吸光度為A對照；在測得A參比後向比色管中加入不同濃度（20.40、10.20、5.10、2.55、1.28、0.64mg/mL）的鬆針精油2.0mL，搖勻後，室溫避光放置30min，測其吸光度為A樣參；向比色管中加入2.0mL0.02mol/LFeSO4溶液、2.0mLH2O溶液，吸光度值為A樣品。清除率的計算公式為：
OH·清除率%=
在2.5mLpH=6.6的磷酸鹽緩衝液中依次加入不同質量濃度（20.40、10.20、5.10、2.55、1.28、0.64mg/mL）的鬆針精油2.5mL，質量分數為1％的鐵氰化鉀溶液2.5mL，混合均勻後在50℃恒溫20min，冷卻，再加入2.5mL質量分數為10％的三氯乙酸溶液，然後以3000r/min離心分離10min，取上層清液5mL，加蒸餾水5mL和質量分數0.1％FeCl3溶液1.0mL，避光靜置12小時後，在波長700nm處測定吸光度，並以維生素C為對照。
試驗重複3次，采用excel、origin9.5軟件作圖，SPSS22.0統計軟件分析。
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