檢測樣品，量取1 mL的衍生10 μg/mL甲醛標準溶液於盛有10 mL衍生液的50 mL具塞離心管中，設置衍生環境pH分別為2,法检3,4,5,6,衍生溫度為60 ℃,衍生時間為60 min, 考察不同pH對甲醛以及樣品衍生的影響。
檢測樣品，测香量取1 mL的菇酱10 μg/mL甲醛標準溶液於盛有10 mL衍生液的50 mL具塞離心管中，設置衍生環境溫度分別為25,柱前中甲40,60,80 ℃,衍生pH為2～5,衍生時間為60 min, 考察不同溫度對甲醛以及樣品衍生的影響，以峰麵積來表示。衍生
回收率：精確稱量勻漿樣品10.00 g, 添加3個梯度的甲醛標準溶液(10,15,20 μg/mL)1 mL至樣品中，靜置5 min,测香 依照本試驗建立的檢測方法進行回收率的驗證，依照2.2.2的菇酱方法操作。
精密度：通過計算單日內每隔2 h連續3次測量10 μg/mL甲醛標準溶液。柱前中甲
方法的衍生線性範圍：按照上述操作條件及色譜條件，每個濃度點平行測量3次，法检測量獲得的测香峰麵積以平均值帶入線性範圍計算。
檢測限及定量限：通過連續稀釋試驗獲得定量極限(LOQ),菇酱並根據10∶1的信噪比(S/N)進行估算；檢出限(LOD)由3∶1的信噪比(S/N)估算，是可通過該方法檢測到或與空白基質的背景噪聲區分開的最低分析物濃度。
香菇醬作為香菇的加工製品，是一種大眾樂見餐桌上的調味醬，但是由於香菇作為香菇醬的主要原材料之一，其甲醛含量偏高,甲醛對皮膚和黏膜具有強烈的刺激作用。香菇在加工保藏過程中依舊含有甲醛殘留,如高溫導致的美拉德反應;加工過程會影響香菇自身代謝從而產生甲醛;包裝會有甲醛的遷移或汙染等。
高效液相色譜法具有檢測限低等優勢，基於此，開發出一種適合香菇醬特性的穩定可靠的甲醛檢測方法。
甲醛標準溶液(100 mg/L)、乙腈(色譜純)、2,4-二硝基苯肼(色譜純)、硫酸銨(分析純)、冰醋酸(分析純):麥克林試劑有限公司；醋酸鈉(分析純):天津市大茂化學試劑廠。
Waters 2695高效液相色譜儀(配紫外檢測器) Waters 公司；分析天平 賽多利斯科學儀器(北京)有限公司；THZ-82A超級恒溫水浴振蕩器 常州澳華儀器有限公司；3K15高速台式離心機 Sigma 離心機(揚州)有限公司；pH計 上海精密儀器儀表有限公司。
將樣品充分勻漿，準確稱取樣品10.00 g, 置於50 mL具塞塑料離心管中，準確加入20 mL衍生緩衝液，蓋緊蓋子，渦旋混勻後置於60 ℃,150 r/min水浴鍋中，振搖1 h, 然後冷卻至室溫。加入5 g硫酸銨，渦旋混勻，以8000 r/min離心10 min後，移取上清液於具塞試管中，下層溶液用10.0 mL乙腈重複萃取1次，離心，合並上清液，用乙腈定容至20.0 mL,混勻，過0.22 μm微孔濾膜，待HPLC檢測。
分別吸取0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mL的甲醛標準溶液，加衍生緩衝液定容至20 mL,配製成0,0.5,1,1.5,2,2.5 μg/mL的標準溶液，蓋緊蓋子，渦旋混勻後置於60 ℃,150 r/min水浴鍋中，振搖1 h, 然後冷卻至室溫，過0.22 μm微孔濾膜，待HPLC檢測，以甲醛的質量濃度作為橫坐標(X),以峰麵積為縱坐標(Y),繪製甲醛溶液標準曲線。
參考色譜條件並加以改進，色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);柱溫25 ℃;紫外檢測器；檢測波長352 nm; 流動相：乙腈-水(70∶30,V/V),進樣量10 μL;流速1 mL/min, 等度洗脫。
檢測樣品，量取1 mL的10 μg/mL甲醛標準溶液於盛有10 mL衍生液的50 mL具塞離心管中，設置衍生環境pH分別為2,3,4,5,6,衍生溫度為60 ℃,衍生時間為60 min, 考察不同pH對甲醛以及樣品衍生的影響。
檢測樣品，量取1 mL的10 μg/mL甲醛標準溶液於盛有10 mL衍生液的50 mL具塞離心管中，設置衍生環境溫度分別為25,40,60,80 ℃,衍生pH為2～5,衍生時間為60 min, 考察不同溫度對甲醛以及樣品衍生的影響，以峰麵積來表示。
回收率：精確稱量勻漿樣品10.00 g, 添加3個梯度的甲醛標準溶液(10,15,20 μg/mL)1 mL至樣品中，靜置5 min, 依照本試驗建立的檢測方法進行回收率的驗證，依照2.2.2的方法操作。
精密度：通過計算單日內每隔2 h連續3次測量10 μg/mL甲醛標準溶液。
方法的線性範圍：按照上述操作條件及色譜條件，每個濃度點平行測量3次，測量獲得的峰麵積以平均值帶入線性範圍計算。
檢測限及定量限：通過連續稀釋試驗獲得定量極限(LOQ),並根據10∶1的信噪比(S/N)進行估算；檢出限(LOD)由3∶1的信噪比(S/N)估算，是可通過該方法檢測到或與空白基質的背景噪聲區分開的最低分析物濃度。
由圖1可知，甲醛的保留時間為5 min。
由圖2可知，在酸性條件下，加強了正電性，有利於2,4-二硝基苯肼的進攻，形成2,4-二硝基苯腙,所以當pH為6時，衍生效果較差。由圖2中A可知，甲醛在pH為4時衍生效果最好，其中pH為2和3時，衍生效果一般，主要是由於過酸的條件下在色譜柱上吸附效果較差。由圖2中B可知，在不同pH的條件下溶出不同的物質，但是這些物質的變化主要集中在4 min以前，不影響對甲醛-2,4-二硝基苯腙的定量。因此，選擇pH 4～5作為反應體係的最適pH,考慮到樣品為半固體，所以通過配製pH 3.6的醋酸鹽緩衝溶液，調節提取液環境，經檢測pH為4.61。
由圖3中A可知，隨著溫度的升高，峰麵積逐漸增加，而80 ℃時的峰麵積最大，其源於在溫度較高的情況下乙腈揮發提升待測溶液中2,4-二硝基苯肼的濃度導致峰麵積增加。由圖3中B可知，隨著衍生溫度的升高，會產生新的醛類物質，影響檢測；而1 h內常溫衍生難以衍生完全，所以選擇40～60 ℃作為反應體係的最適衍生溫度。
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