2、面法酶解胰蛋白酶響應麵優化設計

（1）響應麵設計及結果

響應麵試驗結果見表4，藜麦采用Des遠nExpert8.0.6軟件對表4中數據進行方差、蛋白顯著性分析，制备結果見表5。面法酶解

以酶解時間、藜麦pH、蛋白溫度、制备加酶量為響應變量，面法酶解α-澱粉酶活性抑製率為響應值，藜麦通過響應麵回歸方程分析可知，蛋白藜麥多肽液具有α-澱粉酶活性抑製率的制备多元二次擬合回歸方程為：

Y=44.09+2.53A一1.87B+4.39C+4.47D+1.86AB+1.61AC+7.67AD+9.20BC+1.90BD一4.19CD一9.11A²—12.84B²—1.78C²—9.79D²。

19CD一9.11A2—12.8482—1.78C2—9.79D2。面法酶解

由表5可知，藜麦模型的蛋白P＜0.0001，表示模型回歸差異極顯著，失擬項P=0.8453＞0.05，不顯著，說明擬合程度良好，能真實反映實際情況，模型可靠；模型回歸決定係數R²=0.9728＞0.9，說明α-澱粉酶活性抑製率結果與方程預測結果具有一致性，模型相關度好。試驗模型校正係數R_Adj²=0.9457，表明模型擬合程度較高。說明有94.57％試驗結果值可以用此模型來解釋，因此結果可靠，模型可以對α-澱粉酶活性抑製率值進行分析和預測。由回歸方程式中一次項係數可知，各因素對α-澱粉酶活性抑製率作用大小順序為；加酶量(D)＞溫度(C)＞酶解時問(A)＞pH(B)。

（2）響應麵分析與條件優化

響應麵曲線分析，各因素問等高線圖和交互作用見圖6。

由圖6可知，pH與時間、溫度與pH、加酶量與溫度交互作用的顯著性與表5中交互項P值的分析結果一致。a，c，e均呈橢圓形，表明因素問交互作用顯著，等高線的形狀可以判斷交互作用的強弱，3組等高線圖中加酶量與溫度交互作用最好，等高線中的曲線圍繞著響應麵在中問處形成頂點，即抑製率最大值。a，c，e響應麵圖開口都朝下，隨著每個因素值的增加而響應值增大，在達到響應值最高點後，隨著因素值的增大而響應值減小，響應麵的頂點即為最大響應值。

經DesignExpert8.0.6軟件分析得到優化條件為：酶解時間2.22h、pH8.95、溫度60℃、加酶量0.53×10⁴U／g，在此條件下，曠澱粉酶活性抑製率的理論最大值為47.82％，采用這一結果並結合實際條件，將酶解條件改為：酶解時間2h、pH9.0、溫度60℃、加酶量0.5×10⁴U／g，得到的試驗結果為45.54％，與理論預測值基本一致，建立的模型可以較好地反映藜麥多肽液具有抑製α-澱粉酶活性的能力，同時多肽得率為63.54％。

三、結論

以藜麥蛋白為試驗材料，研究酶解後的多肽對α-澱粉酶活性的抑製率，篩選出最適用酶。在單因素酶解條件下，選擇酶解時間、pH、溫度、加酶量進行Box-Behnken試驗設計，優化結果顯示：加酶量和酶解溫度對α-澱粉酶活性的抑製作用比pH和酶解時間要強。試驗結果表明：製備藜麥多肽的最佳提取工藝為：酶解時問2h、pH9、溫度60℃、加酶量0.5×10⁴U／g，在此條件下α-澱粉酶活性抑製率為45.54％。為了提高多肽液對α-澱粉酶的活性抑製作用，還需對酶解多肽液進行進一步的純化處理。

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