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巨噬细胞识别酿酒酵母孢子的研究(二)

来源:时间:2025-05-03 18:28:28

1.10 單糖或者多糖抑製實驗

用培養基配製終質量濃度為1mg/mL的巨噬酵母昆布糖培養液以及5mg/mL的甘露糖、甘露聚糖、细胞半乳糖、识别乳糖以及鹽藻糖培養液,酿酒取lmL上述含糖培養液和細胞共孵育30min之後,研究加入1mg的巨噬酵母營養態酵母或1mg酵母孢子或200μg葡聚糖微球,離心後進行吞噬實驗並且統計相對吞噬效率。细胞

1.11 野生型孢子和突變體孢子吞噬實驗

取1mg的识别野生型酵母孢子、ditl△孢子和chs3△孢子,酿酒按照1.6方法進行吞噬實驗。研究

1.12 統計分析

采用Graphprism軟件對數據進行分析作圖,巨噬酵母所有數據以平均值+標準差表示。细胞用單因素或雙因素方差分析(One-WavorTwo-WavANOVA)檢驗組間的识别差異。檢驗標準P<0.05表示差異有統計學意義,酿酒每次實驗重複5次。研究對於本實驗統計結果,標記如下:P≥0.05標記為ns:0.01<P<O.05標記為*;0.001<P≤0.01標記為**;P≤0.001標記為***;P≤0.0001標記為****。

2 結果與分析

2.1 巨噬細胞內吞野生型酵母孢子效率高於營養態酵母

營養態酵母壁和野生型酵母孢子壁的結構有所不同.比較巨噬細胞對營養態酵母和野生型酵母孢子的響應,結果見圖1(a)。隨著營養態酵母或野生型酵母孢子質量濃度的增加,巨噬細胞吞噬營養態酵母和野生型孢子的數目呈上升趨勢。當營養態酵母和孢子質量均為lmg時,巨噬細胞吞噬營養態酵母和孢子的情形見圖l(b)。統計分析表明,此時每100個巨噬細胞吞噬酵母或孢子的個數分別為35個和320個。質量為1mg時,酵母孢子個數約為營養態酵母個數的3.7倍,此時孢子被吞噬個數約為營養態酵母個數的9倍。這表明巨噬細胞對酵母孢子內吞效率顯著高於營養態酵母。

2.2 巨噬細胞對酵母孢子的內吞是依賴於Syk和P13K的吞噬過程

巨噬細胞對大顆粒微生物的內吞主要是通過巨胞飲和吞噬過程。巨胞飲指的是細胞依賴於細胞膜流動性的非特異內吞大顆粒過程;吞噬過程指的是免疫細胞膜上受體介導的並且依賴於Syk途徑的內吞過程。已有的研究表明,巨噬細胞吞噬葡聚糖微球依賴於Syk,通過白皮杉醇抑製Svk能夠抑製巨噬細胞對葡聚糖微球的吞噬。利用Svk抑製劑白皮杉醇阻斷Svk所介導的信號通路見圖2(a)。與對照組相比,增加白皮杉醇的濃度會增強抑製巨噬細胞對葡聚糖微球、營養態酵母和野生型孢子的吞噬作用。這表明巨噬細胞對野生型酵母孢子和酵母的內吞途徑是依賴於Svk受體介導的吞噬過程。有研究表明,巨噬細胞吞噬較大顆粒依賴於P13K,配製不同濃度的渥曼青黴素測定其對巨噬細胞吞噬營養態酵母和野生型酵母孢子的影響。如圖2(b)所示,與對照組相比,渥曼青黴素對巨噬細胞吞噬酵母和葡聚糖微球無顯著影響;隨著渥曼青黴素質量濃度的增加,其對巨噬細胞吞噬野生型酵母孢子的抑製作用增強。這表明盡管野生型孢子直徑小於營養態酵母.其吞噬途徑是極其依賴於P13K的過程.而營養態酵母的吞噬過程不是顯著依賴於P13K的過程。因此,巨噬細胞對營養態酵母和野生型酵母孢子的吞噬依賴Svk下遊不同激酶,表明巨噬細胞吞噬營養態酵母和孢子所依賴的信號途徑不同。

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